鴨源葡萄球菌分離鑒定、毒力基因檢測及與致病性相關(guān)性研究.pdf

1、本試驗(yàn)采用細(xì)菌分離技術(shù)、微生物學(xué)技術(shù)、PCR技術(shù)從2011-2013年廣西壯族自治區(qū)以及湖北省部分鴨養(yǎng)殖場送檢的組織中進(jìn)行鴨源葡萄球菌分離鑒定，并研究葡萄球菌毒力基因與對小鼠、家兔、鴨致病性之間的相關(guān)性。
　　從鴨的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦、關(guān)節(jié)、腸組織中分離到細(xì)菌，純化培養(yǎng)后的細(xì)菌經(jīng)生長特性、溶血特性、血漿凝固酶特性、生化培養(yǎng)特性、16SrRNAPCR方法進(jìn)行鑒定，共分離到39株葡萄球菌，其中豬葡萄球菌、表皮葡萄球菌各1

2、株，溶血葡萄球菌2株，金黃色葡萄球菌、科氏葡萄球菌、阿涅蒂斯葡萄球菌各3株，偽中間型葡萄球菌8株，松鼠葡萄球菌18株。
　　本研究根據(jù)文獻(xiàn)和GenBank公布的基因序列合成葡萄球菌的hla、hlb、hlg、hid、coa、pvl、clfA7種毒力因子基因引物，通過PCR檢測表明，39株鴨源葡萄球菌中23.1％(9/39)攜帶有hla基因，25.6％(10/39)攜帶有hlb基因，10.3％(4/39)攜帶有hlg基因，12.8％(

3、5/39)攜帶有hid基因，30.8％(12/39)攜帶有coa基因，25.6％(10/39)攜帶有pvl基因，7.7％(3/39)攜帶有clfA基因。其中豬葡萄球菌G2株表現(xiàn)為coa+，表皮葡萄球菌G4株表現(xiàn)為hid+，松鼠葡萄球菌G74株、阿涅蒂斯葡萄球菌G84株表現(xiàn)為hia+，溶血葡萄球菌僅一株表現(xiàn)為hid+，偽中間型葡萄球菌G6株、G8株、G10株、G29株、G30株、G39株、G87株表現(xiàn)為hla+/hlb+coa+/pvl+

4、，偽中間型葡萄球菌G9株表現(xiàn)為hla+/hlb-/coa+/pvl+。金黃色葡萄球菌G7株、G27株表現(xiàn)為hia+/hlb+/hlg+/hld+/coa+/pvl+/clfA+，金黃色葡萄球菌G54株表現(xiàn)為hia+/hlb+/hlg+/hld+/coa+/pvl-/clfA+。科氏葡萄球菌無毒力因子基因檢測出。可見鴨源葡萄球菌各菌種間毒力因子基因分布存在差異，金黃色葡萄球菌毒力因子分布與國內(nèi)報(bào)道的差異較小。
　　39株鴨源葡萄球菌

5、感染小鼠臨床癥狀和病理變化:偽中間型葡萄球菌G6株、G8株、G10株、G30株，金黃色葡萄球菌G7株、G27株、G54株可引起小鼠腹部接種部位的皮膚出現(xiàn)潰爛。豬葡萄球菌G2株，偽中間型葡萄球菌G29株、G30株、G39株、G87株，金黃色葡萄球菌G7株，松鼠葡萄球菌G74株，阿涅蒂斯葡萄球菌G84株可引起小鼠死亡。
　　豬葡萄球菌G2株、表皮葡萄球菌G4株、松鼠葡萄球菌G5株、偽中間型葡萄球菌G6株、G9株，金黃色葡萄球菌G7株、

6、溶血葡萄球菌G13株、科氏葡萄球菌G24株感染家兔和鴨病理變化:豬葡萄球菌G2株、偽中間型葡萄球菌G6株、金黃色葡萄球菌G7株可引起家兔腎黃豆大小的斑點(diǎn)，鴨胸腺、肝臟出血，心包腔有多量淡黃色透明或半透明液體增多，且偽中間型葡萄球菌G6株、金黃色葡萄球菌G7株引起鴨腹腔內(nèi)有纖維素性滲出物，僅金黃色葡萄球菌G7株引起鴨死亡。金黃色葡萄球菌G54株感染家兔引起腹膜炎。
　　綜上所述，本論文主要完成了鴨源葡萄球菌的分離鑒定，毒力基因的擴(kuò)增