凝固酶陰性葡萄球菌分子鑒定以及路鄧葡萄球菌和解糖葡萄球菌的研究.pdf

1、·凝固酶陰性葡萄球菌的快速分子鑒定
　　目的:建立常見凝固酶陰性葡萄球菌(Coagulase Negative Staphylococcus，CNS)的快速分子鑒定方法。方法:對(duì)15種臨床常見CNS進(jìn)行PCR擴(kuò)增和gap基因測(cè)序，構(gòu)建進(jìn)化樹進(jìn)行同源分析，同時(shí)與16SrRNA基因比較。結(jié)果:15種常見CNS中，gap基因相似率介于39％-94％；16SrRNA基因相似率介于96％-99％，至少2種細(xì)菌99％以上相似率，最多4種葡萄球

2、菌99％以上相似率。進(jìn)化樹同源分析顯示，兩種方法在檢測(cè)緩慢葡萄球菌與松鼠葡萄球菌和產(chǎn)色葡萄球菌與中間葡萄球菌時(shí)，都有很高的可信度；而對(duì)于其它細(xì)菌，gap基因同源分析有較少的不可靠信度(42％，56％)，16SrRNA基因同源分析有較多不可靠信度(41％、44％、51％、55％、64％)。結(jié)論:gap基因序列分析能夠?qū)?5種常見CNS進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，同源分析可信度要明顯優(yōu)于16SrRNA基因。
　　·路鄧葡萄球菌的實(shí)驗(yàn)研究
　　

3、目的:研究路鄧葡萄球菌臨床分布特點(diǎn)及耐藥情況。方法:首先用鳥氨酸脫羧酶和吡咯烷酮芳基酰胺酶對(duì)670株CNS進(jìn)行鑒定，然后用API20 Staph和VITEK2 GP對(duì)兩者陽(yáng)性菌株鑒定，最后用gap基因進(jìn)行最終鑒定；藥敏鑒定采用K-B法，并分別檢測(cè)ermA、ermB、ermC和mecA耐藥基因；分子流行分析采用PFGE方法。結(jié)果:共檢出5株路鄧葡萄球菌(0.7％)，3株細(xì)菌對(duì)紅霉素、克林霉素和青霉素耐藥，攜帶ermC基因；1株細(xì)菌對(duì)頭孢西

4、丁和青霉素耐藥，攜帶mecA基因；1株細(xì)菌沒有產(chǎn)生耐藥。PFGE聚類樹狀圖分析顯示，同源性96.6％兩株細(xì)菌，來自于骨科，同源性96.0％的兩株細(xì)菌，分別來自胎膜早破和新生兒病人，與其它細(xì)菌相似度87.3％以下1株細(xì)菌來自門診。結(jié)論:路鄧葡萄球菌的檢出率相對(duì)低，主要以多重耐藥為主，PFGE分析能夠?yàn)樵摼牧餍刑卣魈峁┬畔ⅰ?br>　　·從骨髓中分離鑒定解糖葡萄球菌
　　目的:建立解糖葡萄球菌的快速分子鑒定。方法:采用洗滌/堿/加熱

5、裂解法從陽(yáng)性血培養(yǎng)瓶中提取DNA，對(duì)細(xì)菌進(jìn)行PCR擴(kuò)增和gap基因測(cè)序，構(gòu)建進(jìn)化樹進(jìn)行同源分析，同時(shí)用E-test方法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果:gap基因序列分析顯示，與該細(xì)菌99％以上相似率有解糖葡萄球菌1種，且該菌與解糖葡萄球菌具有高度同源(bootstraping100％)，E-test實(shí)驗(yàn)MIC結(jié)果萬古霉素1.5μg/mL、青霉素0.002μg/mL、克林霉素0.023μg/mL、左氧氟沙星0.094μg/mL和甲硝唑256μg/mL