金黃色葡萄球菌L型特性、形成機制及致病性研究.pdf

1、 分類號： 分類號：R37 密級： 密級：公開 公開 研 究 生 學(xué) 位 論 文 論文題目（中文） 論文題目（中文）金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌 L 型特性、形成機制及致病 型特性、形成機制及致病性研究 性研究 論文題目（外文） 論文題目（外文）Insights into the Properties, Mechanisms an

2、d Pathogenicity of L-form in Staphylococcus aureus 研 究 生 姓 名 研 究 生 姓 名 徐媛媛 徐媛媛 學(xué) 科 、 專 業(yè) 學(xué) 科 、 專 業(yè) 病原生物學(xué) 病原生物學(xué) 研 究 方 向 研 究 方 向 持留菌形成機制 持留菌形成機制 學(xué) 位 級 別 學(xué) 位 級 別 碩 士 導(dǎo)師姓名、職稱 導(dǎo)師姓名、職稱 韓儉 韓儉 教授 教授 論 文 工 作 論 文 工 作 起 止

3、年 月 起 止 年 月 2014 年 9 月至 月至 2017 年 4 月 論 文 提 交 日 期 論 文 提 交 日 期 2017 年 4 月 論 文 答 辯 日 期 論 文 答 辯 日 期 2017 年 5 月 學(xué) 位 授 予 日 期 學(xué) 位 授 予 日 期 校址：甘肅省蘭州市 校址：甘肅省蘭州市 I 金黃色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌 L 型特性、形成機制及致病性研究 型特性、形成機制及致病性研究 中文摘要 目的： 目的： 探討

4、金黃色葡萄球菌 L 型的特性、形成機制及致病性。 方法： 方法： 建立金黃色葡萄球菌不穩(wěn)定型 L 型模型，使用原子力顯微鏡檢測 L 型形貌及胞內(nèi)壓變化。將轉(zhuǎn)化獲得的 Newman-pCM29 和 Newman-PAH9 與野生株混合誘導(dǎo)培養(yǎng)后，選用激光共聚焦顯微鏡觀察 L 型形成中細(xì)菌間的相互作用；熒光顯微鏡觀察“油煎蛋樣”菌落的生長方式；測定野生型和 L 型的 zeta 電位，分析細(xì)菌 L 型呈聚集生長的原因；光學(xué)顯微鏡和透射電子顯微

5、鏡觀察 L 型的增殖方式；選用藥敏紙片瓊脂擴散法測定金黃色葡萄球菌 L 型對抗菌藥物的敏感性。選用體外溶血試驗判斷金黃色葡萄球菌 L 型形成中溶血能力的變化；利用小鼠皮下感染模型檢測金黃色葡萄球菌 L 型的致病性。選用轉(zhuǎn)錄組測序檢測金黃色葡萄球菌野生型轉(zhuǎn)變?yōu)?L 型過程中基因組表達譜的變化，通過 Q-PCR 驗證生物信息學(xué)分析結(jié)果。 應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡評價熒光蛋白標(biāo)記金黃色葡萄球菌后對L 型生物學(xué)特性和野生型致病性研究的影響。 結(jié)果：

6、 結(jié)果： 1.金黃色葡萄球菌 L 型呈現(xiàn)多形性，具有粗糙的表面，與野生型（61.4 ±5.0 kPa） 相比擁有較高的胞內(nèi)壓 （68.6 ±7.0 kPa） ， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＜ 0.05） 。2.金黃色葡萄球菌 L 型形成中不同來源的菌落間界限分明。L 型形成的“油煎蛋樣”菌落的致密核心部分嵌入瓊脂生長。用 PBS 沖洗后的菌落核心部分及沖洗液中的細(xì)菌均具有形成“油煎蛋樣”菌落的能力；L 型相對于野生型

7、（-16.5mV） 攜帶較少的 zeta 電位值 （-7.7mV） ， 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P ＜ 0.05） 。金黃色葡萄球菌 L 型增殖中出現(xiàn)了向胞外的起泡，出芽及內(nèi)生囊泡多種形式。 3.金黃色葡萄球菌 L 型在誘導(dǎo) 12 小時后的藥敏試驗結(jié)果顯示，與野生型相比，除了對頭孢曲松耐藥外，對抗菌藥物的敏感性呈現(xiàn)增加趨勢，抑菌環(huán)的直徑普遍較野生型增大。在誘導(dǎo) 24 小時后的藥敏試驗結(jié)果顯示，與野生型比較，對頭孢曲松、四環(huán)素和紅霉素耐藥，