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文檔簡介
1、馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)是茄科茄屬多年生草本植物,是我國和世界第四大糧食作物。在影響馬鈴薯生產(chǎn)的諸多外部因素中,影響最大的是由致病疫霉(Phytophthora infestans(Mont.) de Bary)引起的馬鈴薯晚疫病。目前從分子的角度入手研究馬鈴薯晚疫病致病疫霉菌的致病基因是近年來研究的熱點(diǎn)。
本實(shí)驗(yàn)室前期研究已經(jīng)建立了一套提取純化致病疫霉菌代謝產(chǎn)物的體系,并利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析得到了1
2、6個(gè)蛋白序列,其中2個(gè)為膜聯(lián)蛋白,本研究選取了其中一個(gè)進(jìn)行研究,以明確該蛋白是否對馬鈴薯葉片具有毒害作用,同時(shí)對已經(jīng)得到并已明確有毒害作用的pipme1基因成功構(gòu)建了綠色熒光蛋白表達(dá)載體。
以菌株LSX18為實(shí)驗(yàn)對象,Trizol法提取菌絲總RNA,以XP_002897238的核苷酸序列為模版設(shè)計(jì)引物,克隆出一個(gè)膜聯(lián)蛋白基因,命名為anx-1(KJ624634)。anx-1序列全長987bp,包括一個(gè)987bp的完整開放閱讀框
3、,編碼一個(gè)含328個(gè)氨基酸的蛋白,理論分子36.211kDa,等電點(diǎn)為5.54。將anx-1基因進(jìn)行原核表達(dá),將表達(dá)蛋白接種于馬鈴薯離體葉片上,供試葉片未出現(xiàn)類似晚疫病的水漬狀壞死斑。因此,確定anx-1表達(dá)的膜聯(lián)蛋白不是引起馬鈴薯晚疫病、導(dǎo)致組織壞死的因素之一。
同時(shí),根據(jù)已知的具有毒性的pipme1基因序列成功構(gòu)建了一個(gè)綠色熒光蛋白真核表達(dá)載體,該研究將有助于深入研究該病原菌與寄主互作的分子機(jī)制,為研究馬鈴薯晚疫病致病機(jī)制
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