PRRSV體外感染PAMs對TLR3-NF-κB信號通路的分子作用機(jī)制.pdf

1、為探討PRRSV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAMs)后TLR3/NF-κB信號通路的作用機(jī)制,從云南省某豬場購買PRRS陰性的6周齡健康仔豬,用灌洗法獲得PAMs,給予氧化劑和抗氧化劑進(jìn)行預(yù)處理,PRRSV感染后,于6h、12h、24h、48h和72h不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,以未感染PRRSV的PAMs為對照組。觀察實(shí)驗(yàn)組與對照組各時(shí)間點(diǎn)的CPE;應(yīng)用Real-time PCR法對不同組別PRRSV、TLR3、TRIF、TRAF6及NF-

2、κB mRNA水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)分析;應(yīng)用Western Blotting分析不同組別TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果顯示,1)隨時(shí)間的延長及病毒的增殖,細(xì)胞中CPE有明顯的變化,抗氧化劑NAC處理接毒組,與正常接毒組細(xì)胞形態(tài)相比,細(xì)胞變形、聚集數(shù)量及范圍明顯減少,而與對照組相比,只有少量細(xì)胞變形、聚集;氧化劑 H2O2、OxPLs處理接毒組,與正常接毒組細(xì)胞形態(tài)相比,細(xì)胞變形、聚集數(shù)量及范圍增多,而與對照組

3、相比細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,變形嚴(yán)重,聚集成團(tuán)塊;2)Real-time PCR結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組PRRSV、TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB mRNA與對照組相比隨時(shí)間明顯上調(diào)(P<0.05),到48h達(dá)到最大值,抗氧化劑 NAC處理接毒組,其雖有明顯上調(diào),但比正常接毒組同時(shí)間點(diǎn)有所下調(diào),氧化劑 H2O2、OxPLs處理接毒組,mRNA表達(dá)比正常接毒組相同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量有所升高;3)Western Blotting結(jié)果顯示,在PRRS

4、V感染不同時(shí)間點(diǎn)明顯上調(diào)TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB蛋白水平表達(dá)(P<0.05),而且其表達(dá)量與感染之間有時(shí)間依賴性關(guān)系;在抗氧化劑 NAC干預(yù)后,進(jìn)行PRRSV感染,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB的蛋白表達(dá)雖有上調(diào),但表達(dá)量都比正常接毒組同時(shí)間點(diǎn)明顯下降;在氧化劑 H2O2、OxPLs干預(yù)后,進(jìn)行PRRSV感染,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB的蛋白表達(dá)比正常接毒組相同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量明顯升高(P<0