基于線粒體COI基因蚊類庫蚊DNA條形碼技術研究.pdf

1、庫蚊屬（Culex）隸屬于昆蟲綱(Insecta)、雙翅目(Diptera)、蚊科(Culicidae)、庫蚊亞科(Culicinae)，其分布廣泛。目前為止，我國已報道該屬9亞屬計82種，其中很多種類均是重要媒介昆蟲。為了能更好地掌握和防治蚊媒傳染病，準確鑒定媒介蚊類蚊種是很有必要的。目前，形態(tài)特征鑒定是常用的經典方法，但因媒介蚊類鑒定特征細微，容易受形態(tài)完整性影響，形態(tài)學分類方法有時候存在某方面的局限性，另外在近緣種的鑒定上對于專業(yè)

2、積累的要求更為苛刻。因此急需一種快速、精確、可自動化的以及全球通用的分類鑒定工具。線粒體細胞色素C氧化酶Ⅰ亞基( mtDNA COI)基因是目前基因庫中數(shù)據最多的片段，結構與進化動力學研究比較清楚的基因之一，其結構相對保守，種間變異較大，能夠提供豐富的系統(tǒng)發(fā)育信息?；诰€粒體COI基因的DNA條形碼技術可以快速完成物種的鑒定。
　　本研究從已經過形態(tài)學鑒定的庫蚊屬成蚊標本中選取22種蚊，依據采集情況每種1-8只個體，共73只蚊蟲進

3、行其線粒體DNA基因組的提取，并對mtDNA COI基因進行序列擴增、克隆和測序。通過Blast分析，獲得73條COI序列，并對序列特征進行分析。經過分子分類鑒定和類群推測后，從中選出其中的22條有特異性差異的序列，并結合GenBank中庫蚊屬已有的16種蚊蟲的COI序列，以Chironomus nepeanensis為外群，應用MEGA5.1軟件，對38條COI序列系統(tǒng)發(fā)生樹的構建。系統(tǒng)發(fā)生樹的重建釆用NJ法，并依據重建的NJ樹分析中

4、國庫蚊屬蚊蟲間的分類地位和系統(tǒng)發(fā)生關系。以mtDNA COI基因作為DNA條形碼的編碼基因，探討其作為庫蚊屬蚊蟲鑒定的可行性。
　　本研究得到以下結果：
　　（1）mtDNA COI基因在堿基組成、密碼子使用和氨基酸組成具有一定的偏向性。
　　（2）100％蚊蟲COI基因的種內距離均小于2%，除部分蚊種外，蚊蟲種間距離大于2%。
　?。?）COI分子數(shù)據提示：庫蚊屬中兇小庫蚊可能存在隱藏種。庫蚊屬中的包蚊亞屬蚊種

5、兇小庫蚊被聚類于庫蚊亞屬內。小斑翅庫蚊和類斑翅庫蚊可能是東方庫蚊的同物異名。
　?。?）依據mtDNA COI基因的分子標記數(shù)據，對已經進行形態(tài)鑒定的庫蚊屬蚊蟲進行分子鑒定，通過序列差異分析與親緣關系的分析，73只形態(tài)鑒定的成蚊和分子鑒定的結果基本一致。
　　（5）基于mtDNA COI基因序列重建了我國庫蚊屬38個種類的系統(tǒng)發(fā)生樹。支序樹分析結果顯示：8亞屬均能較好區(qū)分出，庫蚊亞屬中尖音庫蚊系與海濱庫蚊系聚為一支，除包蚊亞