基于DNA條形碼技術的魚翅物種鑒別研究.pdf

1、魚翅是我國傳統(tǒng)“海八珍”之一,屬于高值水產加工品,伴隨我國經濟的發(fā)展,魚翅消費量逐年增大,魚翅市場上也因此浮現(xiàn)出諸多亂象。某些商販將明膠等材料或者鰩類魚翅標注為鯊魚魚翅進行販賣干擾魚翅貿易的正常進行,而不法分子捕撈瀕危物種進行割取魚翅不僅對魚翅貿易造成了較大阻礙,也人為加重了某些鯊類的瀕危程度。為了規(guī)范魚翅市場,打擊瀕危物種的貿易并避免欺騙消費者現(xiàn)象的發(fā)生,鑒于此,進行魚翅物種鑒別具有重要意義。傳統(tǒng)的魚翅鑒別主要通過感官鑒定法開展,感官

2、鑒定法能夠提供一定的魚翅商品名分類信息,但無法提供準確的魚翅物種來源信息。鑒于DNA條形碼在水產品物種鑒定中運用廣泛,準確性高等原因,本文基于DNA條形碼方法進行魚翅物種鑒別的相關研究。
　　魚翅為鯊魚魚鰭中的角質鰭條,屬于致密結締組織,細胞含量不豐富。本文中研究的魚翅樣品為市場上最為常見的明翅,即一種半加工形態(tài)魚翅制品。此類魚翅是經由鯊魚魚鰭通過褪沙(去皮),去除殘肉與軟骨,漂白曬干等加工步驟得到的。上述原因造成了魚翅DNA提取

3、的困難。為了獲取能夠滿足條形碼鑒定所需的DNA,本文針對魚翅特性采用了發(fā)制-凍干的前處理方法進行魚翅組織破碎,選取了Chelex-100螯合樹脂法,STE法,經典CTAB法以及試劑盒純化法用于魚翅DNA提取效果的比較以選取最佳方法。根據比較結果,針對CTAB提取方法中的進行了多個步驟的優(yōu)化與改進,提出了改良CTAB法用于魚翅DNA提取。根據DNA濃度值/純度值以及PCR擴增成功率,改良CTAB法能夠獲得較好的魚翅DNA提取效果。

4、　　為了準確進行國內水產市場中魚翅制品的物種來源調查,本文選取了我國北方魚翅貿易中心城市青島及占全國魚翅貿易總量90％以上的廣東省分別進行采樣。本文針對共計例107魚翅樣品進行了DNA條形碼鑒別研究。除了選取COⅠ(cytochrome oxidase subunitⅠ)外,還著重考慮了使用16SrRNA編碼基因進行魚翅鑒別的可行性與準確性。針對魚翅樣品的物種鑒定結果顯示:魚翅的物種來源較豐富,涵蓋不同鯊類10種,如尖吻鯖鯊,路氏雙髻鯊

5、,鐮狀真鯊,大青鯊等;基于16SrRNA序列的鑒定結果與基于 COⅠ序列的鑒定結果一致。多數樣本與已知物種的現(xiàn)有序列之間能夠在聚類關系中形成單系,其中來源于灰鯖鯊屬尖吻鯖鯊的魚翅樣品的存在兩類聚類關系,基于兩基因的聚類關系一致。而針對真鯊屬不同種的鑒定結果顯示,16SrRNA未能鑒別出來源于杜氏真鯊與蒂氏真鯊的魚翅樣本,進一步分析顯示,這是由于NCBI中相關序列(全基因組及16S相關基因)的缺少所造成的,同時也表明基于16SrRNA在進

6、行真鯊屬不同鯊魚物種鑒別水平上的準確性。可以得出結論,16SrRNA基因適用于常見魚翅的物種來源鑒定。
　　本文針對鯊魚物種進行分析顯示,存在兩類雙髻鯊類(路氏雙髻鯊與錘頭雙髻鯊)為華盛頓公約附錄Ⅱ中禁止國際貿易的物種,所占比例達到所檢魚翅的14.01%,上述兩類鯊魚及其相關制品屬于我國二級重點保護動物,其相關貿易違反了我國現(xiàn)有法律條例。此外,所檢魚翅樣品存在大眼長尾鯊、尖吻鯖鯊等根據紅色名單劃分屬于“易?！鳖悇e,雖然我國現(xiàn)目前并