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文檔簡介
1、采用RT-PCR擴(kuò)增豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF7基因的全長cDNA片斷,并將其克隆到pMD-18T載體中進(jìn)行測序,序列分析結(jié)果表面:ORF7基因cDNA編碼區(qū)全長372bp,可編碼123個(gè)氨基酸殘基.將該cDNA片斷克隆到原核表達(dá)載體pGEX-KG的GST編碼基因下游,構(gòu)建了融合表達(dá)質(zhì)粒pKGN.將pKGN轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá).SDS-PAGE分析表明,pKGN在BL21(DE3)中獲得高效表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物
2、主要以包涵體形式存在,分子量約42kD;Western blot試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)該融合蛋白能與豬抗PRRS病毒高免血清發(fā)生特異性反應(yīng),表明該融合蛋白有良好的反應(yīng)原性.經(jīng)8M尿素變性,透析法復(fù)性提取包涵體,用所分離純化的重組蛋白(GST-N)作抗原建立了檢測豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體的間接重組蛋白ELISA方法(rN-ELISA).該ELISA方法具有良好的特異性和敏感性.與國外商品化IDEXX HerdCheck<'R> ELISA試劑盒
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