利用分子生物學(xué)與細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測小型昆蟲的共生微生物沃爾巴克氏體（Wolbachia）.pdf

1、沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文利用分子生物學(xué)與細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測小型昆蟲的共生微生物沃爾巴克氏體（Wolbachia）姓名：張照琳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導(dǎo)教師：叢斌2003.6.1沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)硬士學(xué)位論文攘要沃爾巴克氏體(Wolbachia)是廣泛分布于節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)的～類共生菌，通過生殖細(xì)胞盼細(xì)胞質(zhì)傳播，參與多種調(diào)控其宿主生糠活動(dòng)的稅鑭，W隧誘導(dǎo)宿主發(fā)生生殖不親和、產(chǎn)雌弧雌生娥、雌性化等現(xiàn)象。研究沃爾巴克氏體對于了解昆蟲瓣生

2、殖生物學(xué)、住剮決定稅制、物種遴純及天工調(diào)控昆蟲生殖行為方面意義麓大。試驗(yàn)驀在建立沃爾澄克氏侮(Wolbachia)懿PCR技術(shù)襝溺體系，利用這一體系檢測沃爾巴克氏體在不同分類階元的小型昆墩中的分布；利用細(xì)胞學(xué)技術(shù)麓察沃爾巴克氐俸的努酃形態(tài)。附試驗(yàn)綴采進(jìn)行分拆，德弱戳下結(jié)論：1利用三種昆蟲總DNA攝取的方演一sDs法、單個(gè)昆蟲總DNA提取法、CTAB法分裂褥蘩供試琵蟲卷娥券眼蜂(Trichogrammacacoeciae)、食憝赤眼蜂(T

3、embryophagum)、玉米蠛赤眼蜂(Tostriniae)、稻水象甲(LissorhoptrusoryzophilusKusche玟瀣室自羧氳(Trialeurodesvaporariorum(Westwood))、桃蚜(Myzuspersicae(Sulzer))和煙蚜黻蜂(AphidiusgifuensisAshmead)的總￡雕A。2三種昆蟲總DNA提取方法的OD比值和DNA濃度(p∥p1)的結(jié)果如下，SDS法：138、06

4、6，l，57、14，l。43、06，154、l。2，l。38、0。54，l。56、150；單個(gè)昆煦總DNA提取法：195、129，l，79、O75，150、O54，152、0。96，18e、O27，194、105；CTAB法：16、et3；l。9、l。77，l。57、O99，166、228，171、144。雖然三種方法的結(jié)果與研磨稷度、昆搬種類、蟲體大，l、稆個(gè)數(shù)套一定關(guān)系，但綜會寒說，CTAB法在試驗(yàn)成本、聯(lián)提取惑DNA的濃度和質(zhì)量、

5、PCR反應(yīng)的效果和重復(fù)性三方砸優(yōu)于其他兩種方法，怒一種適臺提毅小型瞧蟲惑DNA的遙熙方法。3建立并驗(yàn)證了沃爾巴克氏體的PCR技術(shù)檢測體系。PCR反應(yīng)體系的終髂積為209l，含騫tUTaqDNA聚合酶期50～200ng模扳DNA。反應(yīng)程序：94。C3min94℃lmin，55℃lmin，72℃1rain，循環(huán)30次_72℃7min。4利用沃爾豈克氏體wsp基因的一對通用弓|物(81F，691R)，以7葶孛供試?yán)ハx的總DNA為模板進(jìn)行PCR