一個(gè)可在板栗疫病菌中自主復(fù)制的穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、將板栗疫病菌整合性質(zhì)粒pCPXHY2上的由Trpc啟動(dòng)子控制的潮霉素基因片段克降到農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化載體質(zhì)粒pCambia1301-35SN外源基因克隆位點(diǎn)上,構(gòu)建成一個(gè)新的質(zhì)粒pGXH1130.用pGXH1130轉(zhuǎn)化板栗疫病菌EP713原生質(zhì)體,其轉(zhuǎn)化效率是pCPXHY2的6倍以上,達(dá)到60~70個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg.挑取的5868個(gè)轉(zhuǎn)化子沒有一個(gè)發(fā)生表型突變,其生長速度、菌體顏色、菌落形態(tài)均與EP713相似.通過對(duì)轉(zhuǎn)化子總DNA進(jìn)行Souther

2、n雜交分析,pGXH1130轉(zhuǎn)化板栗疫病毒后并未插入梁色體基因組中,而是游離于板栗疫病菌染色體外,以一個(gè)自主復(fù)制的質(zhì)粒形式存在.將轉(zhuǎn)化子總DNA轉(zhuǎn)化E.coli,回收到與pGXH1130大小一致的質(zhì)粒.經(jīng)RFLP(EcoRI、XbaI、SalI)分析,pGXH1130轉(zhuǎn)入EP713后未經(jīng)任何修飾或剪切.對(duì)轉(zhuǎn)化子潮霉素抗性表型穩(wěn)定性檢測(cè)表明,在沒有潮霉素選擇壓力下,經(jīng)過6次轉(zhuǎn)接,90﹪的菌體中pGXH1130會(huì)丟失.能自主復(fù)制的pGXH1

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