11個(gè)馬鈴薯晚疫病菌效應(yīng)子基礎(chǔ)功能鑒定.pdf

1、晚疫病菌通過(guò)釋放效應(yīng)子進(jìn)入植物體內(nèi)來(lái)調(diào)節(jié)植物的免疫應(yīng)答反應(yīng)，從而幫助病原菌更易侵染寄主植物?；蚪M測(cè)序發(fā)現(xiàn)晚疫病菌中至少含有500多個(gè)具有RxLR-dEER保守結(jié)構(gòu)域的效應(yīng)子。本實(shí)驗(yàn)在前期晚疫病效應(yīng)子研究基礎(chǔ)上，選取了其中11個(gè)效應(yīng)子，運(yùn)用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)在本氏煙上對(duì)這些效應(yīng)子的基礎(chǔ)功能進(jìn)行鑒定。首先對(duì)效應(yīng)子的表達(dá)模式進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)效應(yīng)蛋白在植物體內(nèi)的表達(dá)情況進(jìn)行了驗(yàn)證，對(duì)效應(yīng)蛋白的亞細(xì)胞定位進(jìn)行了觀察，然后進(jìn)行接種鑒定確認(rèn)效

2、應(yīng)子是否對(duì)病原菌侵染及擴(kuò)展有影響，最后通過(guò)效應(yīng)子與PTI及ETI途徑激發(fā)物的共注射了解這些效應(yīng)子是否會(huì)抑制激發(fā)物誘導(dǎo)的HR反應(yīng)。得到的主要結(jié)果如下:
　　1.在本氏煙上接種晚疫病菌優(yōu)勢(shì)菌株“88069”后，在病菌侵染后0，24，48和72h對(duì)效應(yīng)子的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示11個(gè)效應(yīng)子均在侵染早期顯著上調(diào)表達(dá)。
　　2.通過(guò)Western-blot確認(rèn)效應(yīng)蛋白瞬時(shí)表達(dá)載體的有效性。在本氏煙葉片注射1d后取樣，提取蛋白后進(jìn)行

3、Western-blot，結(jié)果顯示11個(gè)蛋白都可以正常表達(dá)，條帶大小與預(yù)測(cè)一致。
　　3.為了確定效應(yīng)子的亞細(xì)胞定位，在信號(hào)肽切除位點(diǎn)的上游融合了GFP標(biāo)簽。通過(guò)在本氏煙上的瞬時(shí)表達(dá)，結(jié)果顯示四個(gè)效應(yīng)子Pi08278，Pi15972，Pi19617和Pi07555定位在細(xì)胞質(zhì)中;Pi16195，Pi17063和Pi00582定位在細(xì)胞膜上;Pi07550和Pi21388定位在細(xì)胞核和核仁中;Pi09732定位在細(xì)胞膜和類(lèi)細(xì)胞骨架上

4、。
　　4.為了確認(rèn)這些效應(yīng)子是否會(huì)促進(jìn)晚疫病菌的侵染及擴(kuò)展，在本氏煙上進(jìn)行了接種鑒定，結(jié)果顯示Pi15972，Pi19617，Pi16195和Pi09732顯著地促進(jìn)了晚疫病菌的侵染及擴(kuò)展;Pi08278，Pi17063，Pi00582，Pi07550，Pi21388和Pi01934對(duì)晚疫病菌的侵染及擴(kuò)展無(wú)影響;而Pi07555抑制病菌的擴(kuò)展。
　　5.將效應(yīng)子與PTI途徑激發(fā)物INF1和XEG1，ETI途徑的激發(fā)物Avr