29416.葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體glut1、glut2和glut3在粟酒裂殖酵母中的表達(dá)及glut家族進(jìn)化分析

1、重慶大學(xué)博士學(xué)位論文葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體GLUT1、GLUT2和GLUT3在粟酒裂殖酵母中的表達(dá)及GLUT家族進(jìn)化分析姓名：楊妤欣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物制藥指導(dǎo)教師：陳國(guó)平20090615重慶大學(xué)博士學(xué)位論文4不同培養(yǎng)條件下，膜結(jié)合膜蛋白表達(dá)差異與一部分涉及膜蛋白分泌途徑的宿主基因差異表達(dá)相關(guān)。另外，本實(shí)驗(yàn)采用GSTpulldown技術(shù)，驗(yàn)證GLUTl與3一磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde3phosphatedehydro

2、genase，GAPDH)的相互作用。SDSPAGE和WB結(jié)果均提示表達(dá)的GLUTl能與GAPDH在體外相互作用，說(shuō)明在裂殖酵母中異源表達(dá)的GLUTl具有部分生物學(xué)活性。獲得高效的膜蛋白的抗體一直是一個(gè)難題。目前大部分的膜蛋白抗體都是利用多肽片段免疫動(dòng)物得到，并不適用于所有的實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)利用純化的GLUTl蛋白免疫Balb／e小鼠生產(chǎn)了多克隆抗體。經(jīng)SDSPAGE和WB實(shí)驗(yàn)證明該抗體為勻質(zhì)的、特異性高的抗GLUTl小鼠多抗。我們相信

3、這個(gè)抗體將在后續(xù)的對(duì)GLUTl的研究中發(fā)揮重要的作用。最后我們對(duì)GLUT蛋白家族進(jìn)行了進(jìn)化分析。我們通過(guò)從多種原生動(dòng)物，真菌，無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中基因組中分離出GLUT家族成員，構(gòu)建了它們的進(jìn)化樹(shù)，分析了GLUT家族的進(jìn)化歷史。結(jié)果表明GLUT家族的最重大的分化發(fā)生在無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物分化之后，魚(yú)類和陸生脊椎動(dòng)物分化之前。非同義突變與同義突變的比值(Ka／Ks)表明哺乳動(dòng)物的GLUT非常的相似，功能區(qū)非常保守，但魚(yú)類和哺乳類GLUT

4、差異較大，從另一方面佐證了GLUT在魚(yú)類和陸生脊椎動(dòng)物類的發(fā)生了較大的分化。另外我們還單獨(dú)分析了GLUTl的進(jìn)化樹(shù)，通過(guò)生物信息學(xué)工具對(duì)GLUTl在三維結(jié)構(gòu)上的保守區(qū)進(jìn)行了分析，結(jié)果表明GLUTl的保守區(qū)和非保守區(qū)在每個(gè)跨膜區(qū)中是交替出現(xiàn)的。GLUTl家族在其蛋白質(zhì)序列上有58個(gè)最保守的氨基酸位點(diǎn)，其中包含了一些實(shí)驗(yàn)已經(jīng)驗(yàn)證的GLUTl的重要功能位點(diǎn)。在GLUTl中，除已經(jīng)驗(yàn)證QLS和QLG這兩個(gè)重要的模序外，我們還發(fā)現(xiàn)了另外新的一個(gè)非