對(duì)蝦病毒復(fù)合檢測(cè)技術(shù)的建立.pdf

1、該文綜合介紹了對(duì)蝦病毒性病原的研究現(xiàn)狀和病毒性疾病診斷技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀,同時(shí)對(duì)應(yīng)用于對(duì)蝦病毒性病原的診斷和檢測(cè)方法做對(duì)比分析.根據(jù)WSSV,TSV和HPV三種病毒病原在中國(guó)境內(nèi)流行的現(xiàn)狀,建立這三種重要的對(duì)蝦病毒復(fù)合核酸探針檢測(cè)技術(shù).分別利用點(diǎn)雜交和PCR-ELISA原理建立了對(duì)蝦病毒復(fù)合核酸點(diǎn)雜交的檢測(cè)技術(shù)和RT-PCR ELISA同時(shí)檢測(cè)WSSV,TSV和HPV的方法.并克隆TSV三個(gè)主要結(jié)構(gòu)蛋白基因,導(dǎo)入大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá),為后期單克隆

2、抗體的制備提供抗原.該文主要結(jié)果如下:1.復(fù)合核酸點(diǎn)雜交檢測(cè)技術(shù).利用不同的修飾基團(tuán)(地高辛,生物素和熒光素),分別用PCR或隨機(jī)引物法標(biāo)記核酸,通過(guò)點(diǎn)雜交,選擇不同的抗體和底物,利用在硝酸纖維素膜基質(zhì)上發(fā)生的顏色反應(yīng)來(lái)診斷病毒核酸的存在與否.分別建立了同時(shí)檢測(cè)WSSV和TSV,以及WSSV、TSV和HPV的復(fù)合點(diǎn)雜交檢測(cè)方法,檢測(cè)提純核酸和感染組織的靈敏度分別為10和100pg.該項(xiàng)檢測(cè)該技術(shù)可以節(jié)省檢測(cè)的成本和時(shí)間,為對(duì)蝦病毒性病原

3、診斷提供更簡(jiǎn)單快捷的技術(shù).2.復(fù)合RT-PCR ELISA在RT-PCR的基礎(chǔ)上引入了固相DNA分子雜交步驟,建立復(fù)合RT-PCR ELISA同時(shí)檢測(cè)三種病毒的方法.該體系以提取組織的總核酸粗制品為模板,以通過(guò)生物素-鏈親和素橋固定在96微孔板上的寡核苷酸作捕獲探針,與經(jīng)PCR標(biāo)記地高辛的檢測(cè)探針雜交,通過(guò)顏色反應(yīng)來(lái)達(dá)到檢測(cè)病毒核酸的目的,提高RT-PCR檢測(cè)樣品的特異性和核酸雜交的靈敏性.3.TSV主要結(jié)構(gòu)蛋白原核表達(dá)將TSV三個(gè)主要