18791.紅色亞棲熱菌cbs01海藻糖合酶定向進(jìn)化方法的建立及高酶活突變體的篩選_第1頁
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1、南開大學(xué)碩士學(xué)位論文紅色亞棲熱菌CBS01海藻糖合酶定向進(jìn)化方法的建立及高酶活突變體的篩選姓名：劉艷超申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：李明春201205AbstractAbstractTrehalose，animportantnonreducingdisaccharide，hassincebeendetectedinawiderangeoforganismsInindustrialproduceofthesugarenzyme

2、catalyticsynthesisisagoodmethodsinceinvolvingasimpleprocess，lowercostandhighertrehalosepercentconversionTrehalosesynthase(M—TreS)fromtheMeiothP廠聊螂rubberCBS一01catalyzestrehalosebiosynthesisfrommaltosebyonestepMoreovertheM

3、’TreSisapossibleenzymeofindustryforthecharacterofhigherthermostabilityandhighersurvivabilityinextensivepHconditionsItisnecessarvthatweconstructaneffectiVedirectedevolutiontoimprovethecatalyticactivityoftheMTreSThegeneofM

4、—TreSis2889bpandhasalargeevolutionalspaceepPCRcanintroducerandompointmutationsintheM—TreSDNAproducts(必treS)However，itisdifficulttogetawholelengthrecombinantgenebytheDNAshufflingandthestaggeredextensionprocess(STEP)techni

5、quesofthe2889bpgeneAsectionalizeddirectedevolutiontechniqHewhichchangedalongDNAmolecularevolutionintotwoshortfragmentsevolutioncreativelyhasbeenconstructedtoevolvetheMTreSThesectionalizedDNAshufflingcouldintroducerandomh

6、omologousrecombinationwhichthroughtwoPCRstepswithtwopairsofpartiallycomplementaryprimers，the杯treSgenewaspartedintotwosections，afterthetwosectionswereshumedrespectivelyandawholegenewasobtainedbyalinkingPCRprogramthroughth

7、ecomplementaryprimersThesectionalizedStEPhasasimilarproceedingwiththesectionalizedDNAshufflingbutjustneedonestepPCRtoclonethepopulationofthetwopartswithrandomrecombinantpointmutationsBoththeabovemethodscouldintroducemuta

8、tionsintheMtreSeffectivelyThousandsofthemutantsproducedbyabovetechniqueswerescreenedResultsshowedthatsurvivalrateoftheMTreSthroughepPCRis20％a11dfo州ardmutationrateis60％Itl。S10％and30％bythesectionalizedDNAshuffiing’24％and4％

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