15110.重組抗人cd25單克隆嵌合抗體生產(chǎn)工藝及初步藥效學(xué)研究

1、分類號(hào)：&翌I(lǐng)密級(jí)：UDC：華東理工大學(xué)工程碩士學(xué)位論文重組抗人CD25單克隆嵌合抗體生產(chǎn)工藝及初步藥效學(xué)研究王琦指導(dǎo)教師姓名：郭美錦教授華東理工大學(xué)黃陽濱高級(jí)工程師上海新生源醫(yī)藥研究有限公司申請學(xué)位級(jí)別：碩士論文定稿日期：20121216學(xué)位授予單位：學(xué)位授予日期：工程領(lǐng)域：生物工程論文答辯日期：盤竺f!：!璺蘭華東理工大學(xué)答辯委膾搛t磊7c乙搬評閱人：％垓翻睦瞎秀舞南乙嘭秀臻而乙華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第工頁重組抗人CD25單克隆嵌

2、合抗體生產(chǎn)工藝及初步藥效學(xué)研究摘要CD25(IL2Ra)單抗是T細(xì)胞活化的阻滯劑。T細(xì)胞膜表面的IL2R系由Q、B、Y三條肽鏈組成，其中缺乏胞漿區(qū)而無信號(hào)傳遞作用的0c鏈(又稱CD25)對第三信號(hào)中的IL2具有高度親和力。在靜止期的T細(xì)胞它不表達(dá)，初步活化的T細(xì)胞表達(dá)0c鏈后對IL2的親和力極強(qiáng)。CD25單抗則可阻止IL2R與IL2的結(jié)合，使T細(xì)胞不能由G1期進(jìn)入S期，從而阻斷T細(xì)胞的完全活化和克隆增殖、防止排斥反應(yīng)的發(fā)生。歐洲和美國進(jìn)

3、行了大量的研究工作，開發(fā)了SimulectTM和ZenapaXTM等單克隆抗體作為免疫抑制藥物，它們的作用都是以抗CD25(IL2I№)的抗體的形式與活性的T細(xì)胞CD25高特異性結(jié)合，從而抑制IL2與其受體的結(jié)合，抑制移植排斥反應(yīng)。本課題抗CD25的嵌合型單克隆抗體(Lotact1)作為一種大鼠IgG2b九1a單克隆抗體，通過基因工程方法保留鼠源性的單克隆抗體的可變區(qū)，用人抗體恒定區(qū)替代鼠源抗體恒定區(qū)組合成嵌合抗體，降低或避免了鼠源性單

4、克隆抗體在應(yīng)用時(shí)的人抗鼠抗體(humaJlantimouseantibodyresponse，HAMA)反應(yīng)。首先，通過基因工程方法分別構(gòu)建了能表達(dá)抗體重鏈和輕鏈的重組質(zhì)粒，MRC—VH和MRC—VL，然后將此表達(dá)載體分別電轉(zhuǎn)化至NS0細(xì)胞，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)能表達(dá)出新型抗器官移植排斥的嵌合單克隆抗體Lotact1。該單克隆抗體為人一鼠嵌合型單抗，有70％的成分與人源性單抗完全相同。此抗體應(yīng)用于治療時(shí)，不但能夠保留鼠源性單克隆抗體的特異

5、性、親和力和細(xì)胞毒性，同時(shí)不會(huì)引起過敏反應(yīng)，干擾治療效果。通過分子克隆、細(xì)胞表達(dá)、質(zhì)量研究等分子生物學(xué)和藥學(xué)研究工作已基本建立了適合新藥研究生產(chǎn)要求的5L細(xì)胞反應(yīng)器批次培養(yǎng)技術(shù)路線，抗CD25的嵌合型單克隆抗體(Lotact1)的平均表達(dá)量達(dá)108m∥L細(xì)胞懸液，每批次細(xì)胞懸液總收獲體積達(dá)4L。通過體外生物活性研究表明，Lotact。1對淋巴細(xì)胞的增殖具有抑制作用，初步藥效學(xué)研究證明，Lotact1能有效降低大鼠腎移植急性排異反應(yīng)的發(fā)生