結(jié)球甘藍(lán)抗TuMV基因的AFLP標(biāo)記研究.pdf

1、結(jié)球甘藍(lán)(Brassica oleracea var.capitata)簡(jiǎn)稱(chēng)甘藍(lán),屬于十字花科蕓薹屬,原產(chǎn)于地中海沿岸,是世界上廣泛種植的一種重要蔬菜作物.病毒病是甘藍(lán)的一種重要病害.TuMV(Turnip Mosaic Virus)是甘藍(lán)病毒病的主要毒原,主要靠蚜蟲(chóng)以非持續(xù)性方式傳播.采用化學(xué)藥劑防治病毒病效果不明顯,培育抗病品種是一種有效的防治途徑.傳統(tǒng)育種在抗病性轉(zhuǎn)育的過(guò)程中,需要人工接種后,根據(jù)表型用目測(cè)法進(jìn)行抗病性鑒定,存在費(fèi)

2、時(shí)費(fèi)力、轉(zhuǎn)育效率低、因鑒定的誤差有時(shí)容易使目標(biāo)性狀丟失等問(wèn)題.分子標(biāo)記輔助選擇(Marker-Assisted Selection, MAS)為在植物抗病育種中目標(biāo)性狀的選擇提供了一條快速有效的途徑.AFLP標(biāo)記因其具有多態(tài)性高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),在目標(biāo)基因標(biāo)記方面顯示出廣泛的應(yīng)用前景.該研究以中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所育成的甘藍(lán)感病自交系01-16-5-7和抗病自交系20-2-5及其配制的F<,1>代自交后構(gòu)建的F<,2>代分離群體為

3、試材.用侵染中國(guó)甘藍(lán)的TuMV主導(dǎo)致病株系——TuMV-C<,4>對(duì)親本和F<,2>的各個(gè)單株進(jìn)行室內(nèi)人工接種,利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法對(duì)各植株TuMV的抗性進(jìn)行鑒定.根據(jù)鑒定結(jié)果采用BSA法選取不同F(xiàn)<,2>單株構(gòu)建兩對(duì)抗感池,應(yīng)用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)篩選與甘藍(lán)抗TuMV基因連鎖的分子標(biāo)記,在分子水平上為甘藍(lán)抗TuMV輔助育種提供一種快速有效的方法.主要結(jié)果如下:(1)在溫室隔離條件下進(jìn)行苗期人工接種TuMV-C<,4>株系,經(jīng)過(guò)酶聯(lián)免

4、疫吸附檢測(cè),F<,2>代分離群體中抗病單株和感病單株的比例為3.10:1,對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行x<'2>適合性檢驗(yàn),xc<'2>=0.053<=3.84,證明其符合3:1的孟德?tīng)栠z傳分離規(guī)律,表明該群體中對(duì)TuMV的抗性受顯性單基因控制.(2)通過(guò)BSA法,從F<,2>代分離群體中選用極端抗病和極端感病的不同單株構(gòu)建兩對(duì)抗感池.應(yīng)用AFLP技術(shù),對(duì)與甘藍(lán)抗TuMV基因連鎖的AFLP標(biāo)記進(jìn)行了篩選,以8個(gè)EcoRI引

5、物,16個(gè)MseI引物,組成128個(gè)引物組合對(duì)抗感池進(jìn)行篩選,篩選出E<,24>M<,61>引物組合在兩對(duì)抗感池中均出現(xiàn)一條相同差異帶,其片斷大小為530bp,暫將該標(biāo)記命名為E<,24>M<,61>-530.(3)用E<,24>M<,61>引物組合對(duì)親本、建池單株和其他的F<,2>單株進(jìn)一步檢測(cè),并重復(fù)三次,結(jié)果穩(wěn)定.在所檢測(cè)的172個(gè)F<,2>群體單株中,只有23株發(fā)生交換,表明篩選到的AFLP標(biāo)記E<,24>M<,61>-530與