蒼耳組織培養(yǎng)、快繁體系及愈傷組織提取物的抑菌活性研究.pdf

1、化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用，產(chǎn)生了嚴(yán)重的“3R”問(wèn)題(即抗藥性Resistance，再猖獗Resurgence，農(nóng)藥殘留Residence)。從植物中尋找對(duì)有害生物有生物活性的次生代謝物，經(jīng)分離、提純或作為人工合成新農(nóng)藥品種的模板已成為當(dāng)代農(nóng)藥研究的經(jīng)典。 蒼耳在醫(yī)藥、農(nóng)藥等多方面有很高的應(yīng)用價(jià)值，本文對(duì)蒼耳愈傷組織的誘導(dǎo)、組織培養(yǎng)技術(shù)體系的建立、愈傷組織提取物對(duì)番茄灰霉病菌(BotrytiscinereaPers.)的抑菌活性等進(jìn)行了

2、初步的探討研究，并用生長(zhǎng)速率法、黃瓜子葉法對(duì)野生蒼耳、栽培蒼耳、組培蒼耳提取物的抑菌活性進(jìn)行了比較分析，得出以下結(jié)論： 1.以蒼耳葉片、葉柄及莖段為外植體，在MS附加不同激素種類和濃度配比的培養(yǎng)基上對(duì)蒼耳愈傷組織進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，并對(duì)獲得生長(zhǎng)迅速、性狀好的愈傷組織培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基進(jìn)行了系統(tǒng)研究。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)：對(duì)蒼耳莖段進(jìn)行消毒處理時(shí)，0.1﹪升汞消毒5min為較理想的消毒處理；蒼耳愈傷組織在光照培養(yǎng)下生長(zhǎng)快，性狀好；不同組合及濃度配

3、比的培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)率存在顯著差異，蒼耳對(duì)2,4-D敏感，不宜用來(lái)誘導(dǎo)愈傷組織；MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L、MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L的激素組合是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基；葉片、莖段形成的愈傷組織性狀較好，出愈早，出愈率高，量多，愈傷為淺綠色，質(zhì)地疏松，有生活力，是蒼耳愈傷組織誘導(dǎo)的最適外植體。 2.以野生蒼耳種子室內(nèi)盆栽的植株帶腋芽莖段作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)技術(shù)的初步研究和

4、探索。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)：蒼耳帶腋芽莖段接種在不同激素配比的培養(yǎng)基中，其腋芽萌發(fā)率、萌動(dòng)時(shí)間及芽體生長(zhǎng)狀態(tài)均存在明顯差異，MS、MS+KT2.0mg/L為蒼耳腋芽誘導(dǎo)萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基，誘導(dǎo)芽的效果最好。蒼耳莖段在MS+6BA1.0mg/L+GA32.0mg/L的培養(yǎng)基中增殖倍數(shù)較高，有利于叢生芽誘導(dǎo)，而且苗體生長(zhǎng)健壯，為蒼耳叢生芽誘導(dǎo)較好的培養(yǎng)基。NAA使芽先愈傷化，抑制芽的增殖，不宜用來(lái)誘導(dǎo)叢生芽。適宜蒼耳壯苗及繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基為MS+6-

5、BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，在此培養(yǎng)基上，小芽健壯，生長(zhǎng)速度快，莖段增粗，基部產(chǎn)生少量愈傷組織。在附加NAA0.5mg/L、KT2.0mg/L的MS培養(yǎng)基中生根率可達(dá)80﹪以上，根的生長(zhǎng)狀態(tài)最好，呈淺綠色，數(shù)量多，可生長(zhǎng)出旺盛的完整蒼耳再生植株。 3.利用生長(zhǎng)速率法、孢子萌發(fā)法，研究了蒼耳愈傷組織丙酮提取物對(duì)番茄灰霉菌菌絲生長(zhǎng)及形態(tài)、孢子形成及形態(tài)、孢子萌發(fā)的影響。結(jié)果表明：蒼耳愈傷組織丙酮提取物對(duì)番茄灰霉菌具有較

6、強(qiáng)的抑制作用，其抑制菌絲生長(zhǎng)的EC50為20.27mg/mL；抑制孢子形成和萌發(fā)的EC50分別為9.58mg/mL和15.21mg/mL；顯微觀察可見(jiàn)菌絲體變細(xì)、節(jié)間拉長(zhǎng)、分支增多，顏色變淺、胞內(nèi)物質(zhì)外滲、內(nèi)含物減少；產(chǎn)孢極少，長(zhǎng)勢(shì)弱；孢子芽管短小、畸形。 4.利用黃瓜子葉法，對(duì)野生蒼耳、栽培蒼耳、組培蒼耳提取物的抑菌活性進(jìn)行了比較測(cè)定，對(duì)5種供試真菌的有效中量(EC50)和對(duì)番茄灰霉菌保護(hù)作用及治療作用的效果進(jìn)行差異顯著性測(cè)驗(yàn)