15704.桿狀病毒acmnpv核殼體蛋白p7883磷酸化的功能與意義

1、桿狀病毒AcMNPV核殼體蛋白P78／83磷酸化的功能與意義摘要桿狀病毒(Baculoviruses)是一類特異感染節(jié)肢動(dòng)物的雙鏈DNA病毒，主要感染鱗翅目昆蟲。桿狀病毒基因組較大，約80180kb。在其生活周期中存在兩種病毒粒子形態(tài)，首先產(chǎn)生的出芽型病毒粒子BV(Buddedvirus)，介導(dǎo)細(xì)胞間的感染；最后隨著蟲體死亡或細(xì)胞裂解釋放出包埋型病毒粒子ODV(Occlusionderivedvirus)，介導(dǎo)蟲體間的感染。苜蓿銀紋夜蛾

2、核型多角體病毒AcMNPV(Autographacalifornicamultiplenucleopolyhedrovirus)作為桿狀病毒的模式病毒而被廣泛研究。AcMNPV基因組包含154個(gè)基因，其中晚期基因ac9(p78／83)編碼的核衣殼蛋白P78／83是核衣殼的次要組成蛋白，位于核衣殼的基底部。P78／83是一個(gè)磷酸化的蛋白質(zhì)，但是其磷酸化的功能和意義還沒有報(bào)道。論文第一章的綜述部分首先簡(jiǎn)單介紹了桿狀病毒基本情況及其基因組特征

3、。進(jìn)而重點(diǎn)概述了桿狀病毒感染誘導(dǎo)的宿主細(xì)胞肌動(dòng)蛋白聚合，包括肌動(dòng)蛋白聚合的分子基礎(chǔ)，肌動(dòng)蛋白的聚合和調(diào)節(jié)機(jī)制及桿狀病毒感染引起的宿主肌動(dòng)蛋白的重排。最后介紹了AcMNPV核衣殼蛋白P78／83的研究進(jìn)展，提出了本論文的目的和意義。第二章描述了利用BactoBac系統(tǒng)，構(gòu)建P78／83磷酸化位點(diǎn)突變的重組病毒，初步探討了P78／83的磷酸化狀態(tài)對(duì)AcMNPV在Sf9細(xì)胞中增殖的影響。轉(zhuǎn)染再感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：缺失ac9基因的vAcP78腮3

4、Ko不能產(chǎn)生BV病毒粒子；回復(fù)了ac9的vAcP78腮3、ⅣT可以成功拯救ac9基因缺失帶來的影響；P78／83的各種模擬磷酸化突變體相對(duì)于去磷酸化突變體更加有利于病毒復(fù)制；P78／83的T256磷酸化位點(diǎn)的突變對(duì)于病毒復(fù)制的影響最顯著。第三章通過構(gòu)建P78／83七個(gè)磷酸化位點(diǎn)點(diǎn)突變的超表達(dá)質(zhì)粒。初步探討了P78／83的磷酸化狀態(tài)對(duì)其自身功能的影響。蛋白質(zhì)印記和免疫共沉淀結(jié)果表明P78／83的磷酸化狀態(tài)對(duì)其自身的穩(wěn)定性、與C42的相互作

5、用沒有顯著影響；C42與EC27沒有直接相互作用；P78／83的各種磷酸化突變體相對(duì)于C42P78／83EC27的相互作用沒有顯著影響。VnucleocapsidproteinP78／83phosphorylationsitesAbstractIIIBaculovirusesareaverydiversegroupofarthropodspecificlargeDNAviruses，mainlymembersoftheinsectord

6、erLepidopteraBaculovirusesarecharacterizedbyadoublestrandedsupercoiledDNAgenomerangingfrom80toover180kbDuringthelifecycleinthehostcells，theyproducetwodistinctformsofvirions：occludedvirions(ODV)andbuddedvirions(BV)BVsared

7、erivedfromnucleocapsidsleavingthecellnucleusandbuddingthroughtheplasmamembrane，andmediatethespreadofinfectionfromcelltocellLateinbaculovirusinfectionODVsareformedfromnucleocapsidsretainedinthenucleus，whichsubsequentlyemb

8、eddedwithinacrystallinematrixofproteinandreleasedintotheenvironmentuponthedeathofthehostODVsareresponsibleforlateraltransmissionbetweeninsectsAutographacalifomicamulticapsidnucleopolyhedrovirus(AcMNPV)，asthemodelvirusoft

9、hegenusAlphabaculovirusoftheBaculoviridaefamilyisoneofthebestcharacterizedbaculovirusesAcMNPVgenomecotains154predictedopenreadingframes(ORFs)AcMNPVlategeneac9isacoregeneconservedinallsequencedlepidopteranNPVgenomesac9enc

10、odesaminornucleocapsidproteinP78／83，localizedtothebasalregionofmenucleocapsidsP78／83，aviralWiskott—Aldrichsyndromeprotein(WASP)likeprotein，isaphosphorylatedproteinHowever，thefunctionandsignificanceofphosphorylationremain

11、sunknownChapteronegivesabriefintroductionofbaculoviruses，characteristicsofbaculovirusesgenomeThensummarizedtheactinpolymerizationinducedbybaculoviruses，focusingonthethemolecularbasisofactinpolymerization，regulatingmechan

12、ismofactinpolymerizationandactinskeletonrearrangementinducedbybaculovirusesinfection，followingbytherecentresearchprogressonP78／83Intheend，theaimsandsignificanceofthisthesisarepresentedInchaptertwo，inordertounderstandthee

13、ffectofphosphorylationstatusofP78／83onvirusvibialt，r，weconstructedrecombinantvirusvAcP78，83s152A／D，vAcP78，83s15㈣，vAcP78，83T168觚，vAcP78，83T25伽，vAcP78／83s346肌，vAcP78，83T35伽，vAcP78／83T365觚，vAcP78／83WTgpandvAcP78，83Ko卿withth