香菇菌株多相鑒定鑒別技術(shù)研究.pdf

1、香菇(Lentinula edodes)是中國(guó)最早人工馴化栽培的一種著名食用菌,目前中國(guó)雖然是香菇生產(chǎn)大國(guó),但中國(guó)香菇菌株鑒別技術(shù)落后,一直未實(shí)行香菇品種登記制度,品種多樣性存在爭(zhēng)議,品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)得不到真正的保護(hù).拮抗(antagonism)、同工酶(isozyme)、核糖體轉(zhuǎn)錄單位內(nèi)部基因間隔(intergenic spacer,IGS)和隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(random amplified polymorphic DNA,RAPD)是香

2、菇菌株鑒別中經(jīng)常使用的技術(shù),它們各有優(yōu)缺點(diǎn),目前尚沒有關(guān)于這幾種技術(shù)在香菇品種鑒別中的綜合分析的報(bào)道.微生物菌株鑒別研究表明,一種鑒別技術(shù)往往很難達(dá)到理想的鑒別效果,而幾種技術(shù)綜合使用可以明顯提高鑒別力(discriminatory power,D).同時(shí)ISSR(inter simple sequence repeats)作為一種新興的分子標(biāo)記技術(shù),尚未應(yīng)用到香菇的菌株鑒別中.該研究的目的是探討ISSR技術(shù)在香菇菌種鑒別中應(yīng)用的可能性

3、;比較分析拮抗、同工酶、IGS、RAPD和ISSR在香菇菌株鑒別中的應(yīng)用;分析中國(guó)香菇品種的遺傳多樣性.對(duì)中國(guó)香菇栽培品種進(jìn)行調(diào)查,收集41個(gè)主要栽培菌株和2個(gè)野生菌株,分別利用拮抗、同工酶、IGS、RAPD和ISSR進(jìn)行菌株鑒別和聚類分析,結(jié)果表明:過氧化物酶、多酚氧化酶和酯酶三種同工酶中,酯酶(EST)同工酶多態(tài)性最好,可以將43個(gè)供試菌株分成19個(gè)類型,D為0.910;RAPD可以將43個(gè)供試菌株分成20個(gè)類型,D為0.932;I

4、GS<,1>可以將43個(gè)供試菌株分成9個(gè)類型,D為0.844;SR<,1>可以將43個(gè)供試菌株分成10個(gè)類型,D為0.697;IGS<,2>可以將43個(gè)供試菌株分成12個(gè)類型,D為0.781;ISSR可以將43個(gè)供試菌株分成23個(gè)類型,D為0.942.因此,這幾種技術(shù)的分辨力的高低依次是ISSR、RAPD、EST、IGS<,1>、IGS<,2>、SR<,1>.如果將ISSR、RAPD、EST、IGS<,1>、IGS<,2>和SR<,1>

5、六種方法的結(jié)果綜合分析,可以將43個(gè)供試菌株分成29個(gè)類型,D為0.967.同樣,ISSR、EST和IGS<,2>這三種方法的結(jié)果綜合分析也能獲得相同的效果(將43個(gè)供試菌株分成29個(gè)類型,D=0.967).因此,從分辨率的角度來說,ISSR、EST和IGS<,2>這三種方法綜合使用比較適合香菇的菌株鑒別.從穩(wěn)定性和重復(fù)性的角度來看,IGS<,1>、IGS<,2>和SR<,1>三者的穩(wěn)定性和重復(fù)性最好,其次是ISSR和EST,而RAPD