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文檔簡(jiǎn)介
1、麥草畏是一種激素類除草劑,因其廣譜高效、低毒和雜草抗性產(chǎn)生慢等優(yōu)點(diǎn),是理想的抗除草劑轉(zhuǎn)基因工程靶標(biāo)除草劑。發(fā)掘新的麥草畏高效降解菌株和基因具有非常重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。本文從南京土壤樣品中分離到一株麥草畏高效降解菌株,命名為3-3。根據(jù)生理生化特征和16S rDNA序列相似性分析,將其初步鑒定為蒼白桿菌屬(Ochrobactrum sp.)。該菌株在48 h內(nèi)完全降解100 mg/L的麥草畏。菌株3-3降解麥草畏的最適溫度為30℃,最適
2、pH為7.0。對(duì)代謝產(chǎn)物高效液相和質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明菌株3-3降解麥草畏的起始步驟是脫甲基,形成沒有除草活性的3,6-二氯水楊酸(DCSA)。菌株3-3的粗酶液只在NADH存在時(shí)才有麥草畏脫甲基酶活性。PCR擴(kuò)增和該菌基因組生物信息學(xué)分析表明菌株3-3沒有已報(bào)道的麥草畏脫甲基酶基因DMO,Mtv及Dmt或其同源序列。以上研究表明菌株3-3可能存在一個(gè)新的氧化酶類型的麥草畏脫甲基酶基因。
以實(shí)驗(yàn)室分離保存的一株好氧型麥草畏降解菌株
3、Ndbn-20T為研究材料,對(duì)其分類地位進(jìn)行了全面系統(tǒng)的研究。菌株表型特征研究發(fā)現(xiàn),菌株Ndbn-20T為革蘭氏陰性菌,好氧,無(wú)芽孢;在R2A固體培養(yǎng)基上30℃生長(zhǎng)7d,菌落呈淡黃色,圓形,邊緣整齊,不透明。菌株Ndbn-20T的接觸酶和氧化酶均為陰性,能夠進(jìn)行硝酸鹽還原產(chǎn)生N2,水解七葉靈和尿素;能利用核糖,D-木糖,果糖,淀粉和5-酮基-葡萄糖產(chǎn)酸;不能進(jìn)行葡萄糖發(fā)酵,產(chǎn)生吲哚,不能利用對(duì)硝基-β-D-甲基半乳糖;不能水解明膠和同化
4、阿拉伯糖、甘露糖、甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、麥芽糖、葡萄糖酸鉀和蘋果酸;類脂酶(C14)、胱氨酸芳胺酶、胰凝乳蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、β-糖醛酸苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、α-甘露糖苷酶、β-巖藻糖苷酶呈陽(yáng)性;堿性磷酸鹽酶、酯酶(C4)、類脂酯酶(C8)、亮氨酸芳胺酶、纈氨酸芳胺酶、胰蛋白酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶呈陰性。菌株對(duì)鏈霉素、克林霉素有抗性。
菌株化
5、學(xué)及基因分類特征研究發(fā)現(xiàn),Ndbn-20T脂肪酸的主要成分為(>5%):C18∶1ω7c/C18∶1ω6c,46.17%;C16∶1ω7c/C16∶1ω6c,11.68%;C17∶1ω6c,10.96%;C16∶0,10.36%和C14∶02-OH,7.56%;主要的呼吸醌類型為為Q-10;主要極性脂組分有雙磷脂酰甘油、磷脂酰甘油、乙醇酸磷酯、磷酸卵磷脂,神經(jīng)鞘糖脂類、糖脂類和PDME。菌株Ndbn-20T的DNA G+C mol%含量
6、為65.4 mol%;與Ndbn-20T16S rDNA基因序列相似度最高的是Rhizorhabdus argentea SP1T(98.8%),其次是Sphingomonas wittichiiRW1T(97.9%),Sphingomonas starnbergensis382T(97.7%),Sphingomonas histidinilyticaUM2T(97.7%);菌株Ndbn-20T與參考菌株R.argentea SP1T,
7、S.wittichii RW1T、S.histidinilytica UM2T、S.starnbergensis382T的DNA-DNA雜交同源性分別為:45.6±1.9%,33.5±2.3%,39.4±3.6%,42.1±4.1%,均低于70%這一種間界定的閾值。
綜合以上諸多指標(biāo)的詳細(xì)分析,將菌株Ndbn-20T鑒定為Rhizorhabdus屬中的一個(gè)新種,命名為Rhizorhabdus dicambivorans sp.
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