水稻內(nèi)生細菌的分離及促生功能研究和幾株新菌的多相分類.pdf

1、本研究以湖南祁陽農(nóng)田系統(tǒng)國家野外科學研究站長期稻-稻-紫云英、稻-稻-油菜、稻-稻-黑麥草、稻-稻-冬閑四種綠肥輪作下的水稻種子、根為材料，采用可培養(yǎng)方法對水稻種子、根中的內(nèi)生細菌進行分離，研究微生物的多樣性，并篩選出具有促生功能的菌株。對分離出的潛在新菌進行多相分類。
　　通過稀釋涂布平板法對不同綠肥輪作下的水稻種子、根內(nèi)生細菌進行分離、純化，然后利用細菌通用引物，對純化后的菌株進行基于16S rDNA基因序列的PCR擴增。結(jié)果

2、水稻種子中共獲得246株內(nèi)生細菌，其中稻-稻-冬閑、稻-稻-紫云英、稻-稻-油菜、稻-稻-黑麥草輪作下分離出的內(nèi)生細菌分別為42、102、58、44株，它們分別屬于23個屬中的39個種，其中以假單胞菌（Pseudomonas）數(shù)目最多，屬于優(yōu)勢菌;水稻根中共獲得360株內(nèi)生細菌，其中稻-稻-冬閑、稻-稻-紫云英、稻-稻-油菜、稻-稻-黑麥草輪作下分離出的內(nèi)生細菌分別為55、173、72、60株，它們分別屬于31個屬中的50個種，其中以草

3、螺旋屬（HerbaspiriUum）數(shù)目最多，屬于優(yōu)勢菌。
　　用大米湯、阿須貝、TSA和1/4R2A四種不同的培養(yǎng)基對水稻種子內(nèi)生細菌進行分離，結(jié)果表明稻-稻-冬閑輪作下內(nèi)生細菌的數(shù)量為大米湯＞阿須貝＞TSA＞1/4R2A，稻-稻-紫云英輪作下為1/4R2A＞TSA＞阿須貝＞大米湯，稻-稻-油菜輪作下為1/4R2A＞阿須貝＞大米湯＞TSA，稻-稻-黑麥草輪作下為1/4R2A＞大米湯＞阿須貝＞TSA。
　　通過定性或定量的研

4、究方法對挑選出的179株優(yōu)勢種進行促生功能初篩，共篩選出具有溶解無機磷活性的有80株，具有分泌鐵載體能力的有64株，具有分泌IAA功能的有93株。對40株初篩結(jié)果較好的菌株進行復(fù)篩，結(jié)果顯示，具有抗串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)的有28株，固氮功能的有5株。對17株經(jīng)初篩和復(fù)篩結(jié)果中促生功能較好的菌株進行大試管促生能力評價，結(jié)果表明，17株經(jīng)過促生菌株處理的水稻株高、鮮重和干重都高于對照組，經(jīng)過SPSS軟件對其差

5、異性分析，有4株水稻的株高、鮮重和干重和對照組有顯著的差異。并對這些促生功能明顯的菌株進行下一步的田間試驗。
　　對從稻-稻-紫云英輪作下的水稻根內(nèi)、水稻根際土中和松嫩平原鹽堿地土壤中分離出的四株潛在新種ZYY112，1ZS3-5，NEAU-ST5-5和NEAU-ST5-21，從表型特征、化學分類特征和基因型特征方面進行多項分類鑒定。其中包括形態(tài)學特征，生理學特征，生化特征，營養(yǎng)要求，脂肪酸分析，呼吸醌分析，極性脂分析，16S r