水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌遺傳多樣性研究及促生菌篩選.pdf

1、植物體內(nèi)存在著具有促進(jìn)植物生長的內(nèi)生細(xì)菌，可用于開發(fā)微生物肥料，具有促進(jìn)植物生長、無污染、低成本等優(yōu)點。水黃皮是一種生物質(zhì)能源植物，具有耐高溫、耐旱、耐貧瘠、耐鹽堿等特性。本研究從采自海南省文昌縣紅樹林的水黃皮(Pongamiapinnata)根中分離內(nèi)生細(xì)菌，應(yīng)用BOX-PCR和16S rDNA全序列分析等方法對其多樣性和系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行了研究。利用Salkowski比色法測定IAA的分泌量、用鉬銻抗比色法測定溶解無機(jī)磷的能力、采用改進(jìn)的

2、CAS法測定分泌鐵載體的能力、利用Ashby培養(yǎng)基和過硫酸鉀氧化法測定自生固氮能力，進(jìn)而，通過盆栽試驗研究了供試細(xì)菌的促生能力。研究結(jié)果如下:
　　1.從水黃皮根中分離出50株內(nèi)生細(xì)菌，BOXAIR-PCR聚類分析和16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析表明，水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌具有豐富的遺傳多樣性。BOXAIR-PCR聚類分析結(jié)果表明，50株內(nèi)生細(xì)菌在82％的相似水平上聚為6個遺傳群，其中Ⅰ群包含了58％的菌株;而另外，有7株菌獨立成群。

3、r>　　2.根據(jù)BOXAIR-PCR聚類分析結(jié)果，測定了13株代表菌株的16S rDNA序列，構(gòu)建了供試菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，表明水黃皮根內(nèi)生細(xì)菌主要分布于芽孢桿菌屬(Bacillus)、賴氨酸芽孢桿菌屬(Lysinibacillus)、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、棒狀桿菌屬（Coryneb acte rium）、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)6個屬，并揭示了水黃皮根內(nèi)生

4、細(xì)菌具有豐富的遺傳多樣性，且與已知同源菌屬的同源性高(99.2％～100％)。鑒定結(jié)果表明，代表菌株G3、G16和G17屬于Bacillusaryabhattai，G4和G6屬于Bacillus thuringiensis，G9屬于Burkholderia anthina，G10和G26屬于Ochrobactrum anthropi，G14屬于Paenibacillus glycanilyticus，G35屬于Corynebacteri

5、um callunae，G36屬于ysinibacillus fusiformis，G39屬于Bacillus subtilis，而G50屬于Bacillus cereus。
　　3.通過對代表菌株的生物活性測定，獲得了產(chǎn)IAA、溶磷、分泌鐵載體和自生固氮的內(nèi)生細(xì)菌。結(jié)果表明，13代表菌株均產(chǎn)生IAA(17.55～59.55μg/mL)，以G16產(chǎn)量最高，為59.55μg/mL;有76.9％的代表菌株能分泌鐵載體，鐵載體濃度為6.

6、00～104.50μg/mL，菌株G26產(chǎn)量最高，為104.50μg/mL; G9具有溶無機(jī)磷能力，其溶磷量為4.87μg/mL; G9、G14、G10和G26具有自生固氮能力，固氮量為1.57～6.84μg/mL，以G10固氮能力最強(qiáng)，培養(yǎng)液中全氮量達(dá)到6.84μg/mL。對G3、G9和G10進(jìn)行水黃皮盆栽接種試驗，結(jié)果表明這3株P(guān)GPB能夠不同程度地促進(jìn)水黃皮的生長，其中G10的促生效果最明顯，水黃皮植株干重和植株含氮量較對照顯著增

7、加。
　　4.篩選獲得了5株產(chǎn)鐵載體能力強(qiáng)的內(nèi)生細(xì)菌(G3、G9、G10、G17和G26)，其產(chǎn)鐵載體的濃度為41.50～104.50μ g/mL;進(jìn)而，盆栽試驗驗證了這5株內(nèi)生細(xì)菌對花生的促生效果。結(jié)果表明，接種供試菌株促進(jìn)了花生吸收N、P、K和Fe元素，增加花生植株干重。其中，接種G10和G26，花生干重增加了6.78和23.72％、植株全氮量增加96.94％和76.53％，植株全磷量增加了17.71％和20.83％，植株全鉀