藍(lán)莓根際促生細(xì)菌的篩選、鑒定及其促生效果.pdf

1、藍(lán)莓是重要經(jīng)濟(jì)作物，近年來，在山東、遼寧等北方地區(qū)種植面積不斷擴(kuò)大。由于藍(lán)莓根系不發(fā)達(dá)、吸收養(yǎng)分能力差，喜好偏酸土壤環(huán)境、適宜土壤pH為4.5-5.5，制約了藍(lán)莓生產(chǎn)。植物根際促生菌（Plant Growth-Promoting Rhizobacteria, PGPR）具有促進(jìn)植物根系生長(zhǎng)發(fā)育、調(diào)控和改善根際土壤環(huán)境、防治土傳病害等多種作用。本研究從藍(lán)莓根際篩選生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌、蛋白酶產(chǎn)生菌、產(chǎn)酸菌及溶磷細(xì)菌等，并進(jìn)行鑒定；通過營(yíng)養(yǎng)缽苗和穴

2、盤苗盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證其促生效果；運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)探究BIA070和BPR176菌株對(duì)根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的影響；對(duì)BIA070菌株進(jìn)行GFP標(biāo)記，探究其根際定殖能力；研究產(chǎn)酸菌對(duì)土壤pH的影響。為藍(lán)莓專用PGPR微生物肥料研制與推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　　從藍(lán)莓根際篩選到生長(zhǎng)素產(chǎn)生菌14株、蛋白酶產(chǎn)生菌12株、溶磷細(xì)菌6株。通過穴盤苗試驗(yàn)和營(yíng)養(yǎng)缽苗試驗(yàn)，初步確定了10株促生效果較好的菌株，鑒定結(jié)果顯示：BIA032屬于Leucobac

3、ter aridicollis，BIA044、BIA088、BPR082、BPR088、BPR176屬于阿氏芽孢桿菌（Bacillus aryabhattai），BIA070、BIA141屬于陰溝腸桿菌（Enterobacter cloacae），BPR142屬于解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens），BIP191屬于分散泛菌（Pantoea dispersa）。
　　盆栽條件下，BIA032、BI

4、A044、BIA088、BIA141、BPR082、BPR142、BIP191菌株能促進(jìn)藍(lán)莓營(yíng)養(yǎng)缽苗地徑和株高增加；BPR088、BIA070、BPR176促進(jìn)了藍(lán)莓穴盤苗的生長(zhǎng)，與對(duì)照相比，植株株高和地上部干重都達(dá)到顯著性差異，株高分別增加了61.23％、38.92%、35.05%，地上部干重分別增加了92.65%、64.13%、47.58%；BPR088、BPR176還顯著增加了藍(lán)莓的地徑，分別增加了24.58%、17.47%，BI

5、A070也促進(jìn)了藍(lán)莓地徑的增長(zhǎng)，但沒有達(dá)到顯著性差異；BPR176處理的植株葉片葉綠素含量同對(duì)照相比增加了25%，達(dá)到顯著性差異；BIA070和BPR088降低了葉片丙二醛含量，提高了過氧化物酶活性，提高了藍(lán)莓植株抗逆性。
　　通過營(yíng)養(yǎng)缽苗試驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證上述10個(gè)菌株的促生效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，BIA032、BIA070、BIA141、BPR088、BPR176菌株的促生效果明顯。與對(duì)照相比，顯著促進(jìn)藍(lán)莓地徑生長(zhǎng)，分別增加了22.

6、16%、36.22%、21.70%、18.29%、22.06%；提高了地上部鮮重和干重，地上部干重分別增加了38.89%、35.19%、37.04%、14.18%、29.63%，除BPR088外，其它4個(gè)菌株都達(dá)到了顯著性差異；在一定程度上促進(jìn)了株高和葉片數(shù)的增加。與對(duì)照相比，供試菌株處理增加了植株全氮含量，其中BPR176增加了23.82%，達(dá)到顯著性差異；土壤堿解氮、速效磷和有機(jī)質(zhì)含量均有不同程度提高，土壤酸性磷酸酶、蛋白酶以及蔗糖

7、酶活性均有所提高。
　　高通量測(cè)序結(jié)果表明，藍(lán)莓根際土壤細(xì)菌群落優(yōu)勢(shì)門為變形菌門、酸桿菌門、擬桿菌門，真菌群落優(yōu)勢(shì)門為子囊菌門和擔(dān)子菌門；BIA070和 BPR176兩株菌都改變了藍(lán)莓根際土壤的細(xì)菌和真菌群落結(jié)構(gòu)。
　　將BIA070進(jìn)行GFP標(biāo)記，得到標(biāo)記菌株 BIA070（gfp），質(zhì)粒穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果表明gfp基因能夠在BIA070中穩(wěn)定表達(dá)。通過盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證，BIA070（gfp）能在藍(lán)莓根際定殖。
　　從藍(lán)莓根

8、際分離到12株產(chǎn)酸能力較強(qiáng)的菌株，其中11株細(xì)菌，1株酵母菌。分類鑒定結(jié)果顯示：BAC006、BAC011、BAC062屬于產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes）， BAC025、BAC031、BAC049、BAC064屬于大腸桿菌（E.coli），BAC007、BAC041屬于檸檬酸桿菌屬（Citrobacter sp.），BAC067屬于陰溝腸桿菌（Enterobacter cloacae）， BAC068屬于雷

9、金斯堡預(yù)研菌（Yokenella regensburgei），BAC089屬于熱帶假絲酵母（Candida tropicalis）。
　　HPLC測(cè)定結(jié)果顯示：細(xì)菌產(chǎn)酸種類主要為草酸、乙酸、檸檬酸，BAC006發(fā)酵液中主要為草酸，濃度達(dá)到1393.316μg/mL，BAC007、BAC031、BAC067、BAC068乙酸產(chǎn)量較高，濃度分別為9741.763μg/mL、18557.486μg/mL、7731.176μg/mL、90