四川盆地大豆根瘤內(nèi)生細(xì)菌分離鑒定及促生效果研究.pdf

1、本研究以四川盆地各地區(qū)盛花期大豆根瘤為樣品，用劃線分離方法獲得其內(nèi)生細(xì)菌。應(yīng)用16S rDNA PCR-RFLP、代表菌株16S rDNA序別分析等方法探究四川盆地大豆根瘤內(nèi)生細(xì)菌遺傳多樣性，確定其系統(tǒng)發(fā)育地位;繼而以大豆材料，應(yīng)用盆栽試驗(yàn)篩選出具有促生能力的優(yōu)良菌株，對(duì)其產(chǎn)IAA、產(chǎn)鐵栽體、溶磷和固氮能力等促生特性進(jìn)行了研究;并以豌豆、蠶豆和玉米為供試植物，盆栽試驗(yàn)驗(yàn)證了優(yōu)良菌株的際促生效果。獲得了以下結(jié)果:
　　1.從四川盆地

2、不同區(qū)域采集大豆根瘤材料中分離獲得130株內(nèi)生細(xì)菌，16SrDNA PCR-RFLP分析中，供試菌株共形成了81個(gè)遺傳型，聚類分析將其分成了5個(gè)遺傳分支，顯示出豐富的遺傳多樣性。除菌株DA13-1外，其余菌株分屬于4個(gè)遺傳群，其中群Ⅰ為優(yōu)勢(shì)群，包含62個(gè)菌株，占到47.7％;其次為群Ⅳ、群Ⅲ和群Ⅱ，分別由40、17和10個(gè)菌株組成。
　　2.選取40個(gè)代表菌株，測(cè)定了16S rDNA序列，構(gòu)建了代表菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明40個(gè)

3、代表菌株分屬于芽孢桿菌屬(Bacillus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、中華根瘤菌屬（Sinorhizobium)、慢生型大豆根瘤菌屬（Bradyrhizobium）和腸桿菌屬（Enterobacter）。以芽孢桿菌屬為優(yōu)勢(shì)菌群，包括B.subtilis, B.aryabhattai,B.methylotrophicus, B.simplex, B.idriensis和B.umilus等6個(gè)種，尤其以Bacillusmeth

4、ylotrophicu最多。其次為中華根瘤菌屬和假單胞菌屬為的細(xì)菌種群占優(yōu)勢(shì)。
　　3.以大豆為材料，盆栽試驗(yàn)初步篩選出了12株對(duì)大豆具有促生作用的細(xì)菌，均具有分泌IAA能力，濃度為0.353-32.404μg/mL，菌株Enterobacter sp.D13-3的IAA產(chǎn)量最高，達(dá)32.404±0.002μg/mL;其次是菌株B.methylotrophicus DA8-1，IAA產(chǎn)量為11.282±0.006μg/mL;有7株

5、具有產(chǎn)鐵載體能力，鐵載體活性單位為7.35％-34.31％，菌株DA13-1、DB30-2和DB1-3產(chǎn)鐵載體能力較強(qiáng)，產(chǎn)鐵載體活性單位分別達(dá)到了34.31％、32.35％和31.37％;有11株具有溶磷能力，在濃度為5g/L Ca3(PO4)2的培養(yǎng)液中，有效磷含量可達(dá)4.26-10.6μg/mL;6株細(xì)菌包括3株根瘤菌，Enterobacter sp.DA10-3, Bacillus methylotrophicus DA8-1和P

6、seudomonas monteilii DB19-3表現(xiàn)出了自生固氮能力。
　　4.采用盆栽實(shí)驗(yàn)研究了12個(gè)菌株對(duì)豌豆、蠶豆和玉米盆栽促生效果，結(jié)果顯示，大部分菌株對(duì)供試植物具有一定的促生效果。其中，DA8-1(B.methylotrophicus)和DA16-5(B.methylotrophicus)的促生效果較好，DA8-1對(duì)大豆、蠶豆和豌豆都具有促生作用，DA16-5對(duì)大豆、蠶豆和玉米均表現(xiàn)出較好促生效果。接種后土壤養(yǎng)分明