嗜熱菌的分離與一株高溫放線菌新種的多相分類鑒定.pdf

1、摘要嗜熱菌的分離與一株高溫放線菌新種的多相分類鑒定摘要嗜熱菌是指能生活在50℃以上高溫，最適生長(zhǎng)溫度在45一80℃以上的一類極端微生物.自從70年代Brock發(fā)現(xiàn)嗜熱菌以來，日本、意大利、冰島、美國(guó)等國(guó)家大力開發(fā)嗜熱菌資源.我國(guó)各地分布著數(shù)童眾多、生態(tài)環(huán)境各異的溫泉及其他高溫環(huán)境，具有豐富的嗜熱菌資源.但從目前的相關(guān)報(bào)道看來，我國(guó)對(duì)于嗜熱菌資源的研究開發(fā)還不是很多.本實(shí)驗(yàn)從云南騰沖的溫泉淤泥和水樣樣品中分離到了18株嗜熱菌，經(jīng)過形態(tài)觀察

2、、生理生化特性和16SrDNA序列分析，除菌株LA5為放線菌外，其余都是Bacillus屬或Geobacillz。屬的菌株.這些嗜熱菌生長(zhǎng)的最適溫度為60一70C.其中三株高溫蛋白酶產(chǎn)生菌SB11.SB31和SC5，經(jīng)初步鑒定都屬于Geobacillus屬，產(chǎn)高溫蛋白酶的酶活力分別為35.6.26.1.26.6UmL.雖然三菌株的最適生長(zhǎng)溫度為60C，但其產(chǎn)生的蛋白酶的最適酶反應(yīng)溫度都在70℃以上，遠(yuǎn)高于一般動(dòng)植物來源的蛋白酶.菌株LA

3、5是一株高溫放線菌.菌落乳黃色，呈放射狀坡紋，形成黃色或白色的基質(zhì)菌絲和袍子，袍子層較厚，沒有氣生菌絲，不產(chǎn)生可溶性色素.在LB.PDA、蛋白陳酪素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，在甘油天冬酸胺、高氏一號(hào)、察氏、牛肉青蛋白膝培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較差，在ISP4.淀粉酪素、甘油淀粉培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。在光學(xué)、相差、電子顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)基內(nèi)菌絲上均有單個(gè)袍子，生長(zhǎng)在不分支的袍子梗上.高溫放線菌LA5可以發(fā)酵葡萄糖、果糖、木糖、纖維二糖，不能發(fā)酵阿拉伯糖、棉子糖、鼠

4、李糖VP試驗(yàn)、M.R試驗(yàn)、苯丙氛酸脫氫酶試驗(yàn)、檸檬酸鹽試驗(yàn)反應(yīng)陽(yáng)性，引味試驗(yàn)反應(yīng)陰性液化明膠，降解淀粉、酪素，不降解纖維素、果膠能利用有機(jī)氮(酵母青、牛肉青、蛋白膝、尿素)和無機(jī)氮(梢酸按、硫酸按、氛化按)，利用乳糖、半乳糖最好，其他糖類(葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖、麥芽糖)利用效果一般或較差好氧pH生長(zhǎng)范圍是610，最適pH是8.5生長(zhǎng)M度為5075C，最適生長(zhǎng)溫度為6070℃沒有杭微生物活性物質(zhì)的產(chǎn)生.高溫放線菌LA5的化學(xué)組成為:細(xì)

5、胞壁含有mesoDAP(II型)，但無特征性糖主要的脂肪酸(10%)為isoCn:o(27.66%)和C16:0(22.38%)醒的組成成分為MK7(66.58%)和MK8(瓏)(33.42%).16SrDNA序列分析表明，菌株LA5屬于尸1anifilum屬DNAG十Cmol%為56.8m01%菌株LA5與Plan價(jià)lum屬僅有的兩個(gè)種Planifilum血烤idum500275和Plan價(jià)lumfuneticolaH0165進(jìn)行DN

6、ADNA雜交，同源性分別為43.6%a.52.7%.摘耍ISOLATIONOF1HERMOPHILYSANDPOLYPHASICIDENTIFICATIONOFANEWSPECIESOFTHERMOACTINOMYCETEABSTRACTTheextremophileshaveuniquegenesphisiologicalcharacteristicsandmetabolitescomparedwithcommonmicroorgan

7、isms.Extremophilesareofinteresttobothbasicandappliedbiology.Manyextremophilesinparticularthehyperthermophileslieclosetothe“universalancestor“ofallextantlifeonEarth.Thisexcitingrealizationhasfueledmuchresearchontheseorgan

8、ismsinordertounderstandthenatureofprimitivelifeformshowthefirstcels“madealiving“inEarthsearlydaysandhowearlyorganismssetthestagefortheevolutionofmodemlifeforms.Manythermophileshavebeenisolatedaroundtheworld.InChinatherea

9、remanydifferenthotspringsinwhichthermophilesusuallylive.Butlessthermophileshavebeenfound.18thermophilicstrainswerereportedhereisolatedfromhotspringsinYunnan.Basedonthetheirconfigurations，physiologicalandbiochemistryfeatu

10、res16SrDNAsequencemostofthembelongtothegenusGeobacillusandBacillusexceptthestrainLA5.Theoptimumgrowthtemperatureof18strainswere6075℃.Threeproteaseproducingstrains(belonedtoGeobacillus)SBllSB31andSC5werestudiedinmoredetai

11、l.Theproteaseactivitieswere35.626.126.6UmLrespectively.Althoughtheygrewbestat60℃，theirproteaseactivitieswerehighestat70℃，higherthanthosefromanimalsandplants.StrainLA5wasathermoactinomyces.Itscolonywascreamyelowwithradial

12、winkles.Theisolategrewaerobicalyattemperatureof5070℃andat聲610.Theaerobicmyceliawasntbeobserved.Singlesporeswereproducedalongthesubstratehypha.ThestrainLA5utilizedglucosefructosexyloseglutinCasinandstarchbutnotarabinosera

13、ffinoserhamnosecelobioseHypoxanthineXanthineandLTyrosine.ThestrainLA5couldgrowbetteronthefollowingmedia:LBPDACzapekandStarchCaseinbutweakonGlycerolAsparagineandGausesSyntheticmeadium.Chemotaxonomicalana妙sisrevealedthepre