乳源球菌菌株的多相分類鑒定.pdf

1、對(duì)9株乳源球菌株(5株乳酸乳球菌、3株嗜熱鏈球菌和1株無(wú)乳鏈球菌)進(jìn)行菌株水平上的多相分類鑒定。通過(guò)MRS固體平板培養(yǎng)基反復(fù)劃線和形態(tài)學(xué)觀察進(jìn)行菌株的分離純化，包括菌落觀察、菌體細(xì)胞壁革蘭氏染色的光鏡觀察和菌體常規(guī)磷鎢酸負(fù)染色標(biāo)本的透射電鏡觀察，并采用依據(jù)乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)和嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)菌種水平上的生化代謝差異設(shè)計(jì)的生化試驗(yàn)和基于差異代謝的關(guān)鍵酶編碼基因序

2、列的差異設(shè)計(jì)引物的特異性PCR以及RAPD對(duì)這9株乳酸菌進(jìn)行鑒定。依據(jù)菌落和菌體細(xì)胞的大小差異，劃線分離得到11株乳酸菌；通過(guò)透射電鏡觀察，描述各菌體的大小、形狀以及裂殖方式；生化試驗(yàn)得到了2個(gè)發(fā)酵型，將其鑒定為2個(gè)菌群(乳酸乳球菌乳酸亞種和嗜熱鏈球菌)，而特異性PCR擴(kuò)增在菌株水平上將其鑒定為9株菌(6株乳酸乳球菌、2株嗜熱鏈球菌和1株無(wú)乳鏈球菌)，與RAPD鑒定結(jié)果(20個(gè)隨機(jī)引物的RAPD篩選也得到了9個(gè)不同的基因型)一致。此外，

3、本實(shí)驗(yàn)還獲得了2個(gè)乳酸乳球菌的種特異性PCR引物L(fēng)clamyLF-R和LclmapA2F-R、2個(gè)嗜熱鏈球菌的種特異性PCR引物SttglgPF-R和SttamyLF-R以及乳酸乳球菌乳酸亞種(Lactococcuslactissubsp.lactis)株AS1.1936的株特異性PCR引物L(fēng)clamyYF-R，并推測(cè)其α-淀粉酶基因(amyY)與其他乳酸乳球菌株之間存在序列差異。 本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行Lactococcuslactis和

4、Streptococcusthermophilus菌種菌株的表型特性及其分子水平的研究，首次比對(duì)其基于菌種水平分類的代謝酶編碼基因的序列，設(shè)計(jì)菌種水平的特異性PCR引物，做出這些菌種不同菌株的PCR鑒定，并以1株經(jīng)證實(shí)已應(yīng)用于牛乳發(fā)酵的Streptococcusagalactiae作為對(duì)照，以達(dá)到更加可靠的分類和鑒別。為L(zhǎng)actococcuslactis和Streptococcusthermophilus的相關(guān)科學(xué)研究和工業(yè)化生產(chǎn)提供理