香菇主要栽培菌株遺傳多樣性分析和分子鑒定.pdf

1、香菇(Lentinulaedodes)是中國(guó)主產(chǎn)的食用菌之一，在食用和藥用方面有著重要的作用。為進(jìn)一步選育優(yōu)良品種、研究香菇品種的親緣關(guān)系、有效的保護(hù)和利用現(xiàn)有的優(yōu)良的種質(zhì)資源，并為完善現(xiàn)有香菇品種的自主產(chǎn)權(quán)制度和新品種保護(hù)提供分子水平品種鑒定技術(shù)。本研究在摸索適用于香菇的銀染法AFLP分子標(biāo)記技術(shù)體系的基礎(chǔ)上，以收集到的26株在國(guó)內(nèi)廣泛栽培的香菇菌株以及5株來自日本的香菇栽培品種作為供試材料，建立了香菇主要栽培品種的DNA指紋圖譜，對(duì)

2、其遺傳多樣性進(jìn)行分析。利用優(yōu)化的AFLP技術(shù)體系和CEQ遺傳分析儀分析檢測(cè)了31個(gè)香菇菌株的AFLP反應(yīng)，構(gòu)建了香菇的AFLP遺傳信息數(shù)據(jù)庫，分析探討了香菇菌株的分子鑒定。得到以下主要結(jié)論： 1、針對(duì)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的試驗(yàn)條件，建立并優(yōu)化了適用于香菇的AFLP銀染反應(yīng)體系，并在DNA提取、限制性內(nèi)切酶酶切、接頭連接、兩次擴(kuò)增以及銀染技術(shù)等多個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行了探討，優(yōu)化反應(yīng)條件的基礎(chǔ)上得到了穩(wěn)定、清晰、分辨率較高的指紋圖譜。。 2、

3、對(duì)引物組合進(jìn)行了篩選，從譜帶總數(shù)、多態(tài)性帶數(shù)、譜帶分離情況、譜帶清晰情況加以評(píng)價(jià)，引物組合經(jīng)過最終篩選得出了帶數(shù)較多、條帶清晰度高、多態(tài)性較高的6對(duì)引物，用于后面的AFLP多態(tài)性檢測(cè)。 3、運(yùn)用所篩選的引物組合建立了31株香菇主要栽培品種的DNA指紋圖譜。每個(gè)引物組合的擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)為50～80個(gè)，用6對(duì)引物共擴(kuò)增得到了443條DNA帶，其中189條為所有菌株都共有的條帶，多態(tài)性條帶為254條，多態(tài)性比率為57.34％，說明收集到的

4、香菇菌種具有一定的遺傳多樣性，他們之間存在一定的遺傳差異。運(yùn)用NTSYS-pc2.1Version分析軟件計(jì)算遺傳相似聚類，直觀表現(xiàn)品種的相似程度。盡管部分香菇菌株間的親緣關(guān)系非常接近，但在指紋圖譜上個(gè)體間仍然表現(xiàn)出差異，說明AFLP能夠高效的鑒別香菇菌株。 4、利用CEQ遺傳分析儀檢測(cè)香菇菌株AFLP反應(yīng)的擴(kuò)增結(jié)果，采用5對(duì)引物對(duì)31個(gè)菌株進(jìn)行擴(kuò)增，共得到786條條帶，其中共有條帶為113條，這可能是香菇菌株的共有帶，多態(tài)性條

5、帶為673條，檢測(cè)出的多態(tài)性比率為85.6％，相比較銀染方法CEQ儀器在檢測(cè)效率上明顯要高。 5、利用5對(duì)引物對(duì)31個(gè)菌株進(jìn)行擴(kuò)增的CEQ檢測(cè)結(jié)果，構(gòu)建了由31個(gè)香菇菌株組成的AFLP遺傳信息數(shù)據(jù)庫，庫中數(shù)據(jù)詳細(xì)標(biāo)明AFLP擴(kuò)增條帶的大小、強(qiáng)弱。對(duì)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，得到一些能穩(wěn)定重復(fù)的DNA分子標(biāo)記，分別是：45(E11M17：101.20，E14M18：136.36)，507(E11M17：170.87)，7402(E14M18