中國主要東方蜜蜂種群的遺傳多樣性分析

1、中國主要東方蜜蜂種群的遺傳多樣性分析中國主要東方蜜蜂種群的遺傳多樣性分析任勤1，曹聯(lián)飛2，趙紅霞3，王瑞生1，程尚1，羅文華1曹蘭1，姬聰慧1（1.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶402460；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，浙江杭州310021；3.廣東省生物資源應(yīng)用研究所，廣東廣州510260）摘要：要：對中國具代表性的東方蜜蜂遺傳資源中7個種群的線粒體DNAtRNAleu～COⅡ基因進行擴增和測序并進行遺傳多樣性比較及親緣關(guān)系分析。結(jié)果表明，共發(fā)現(xiàn)4

2、3個單倍型，其中10個單倍型在GenBank數(shù)據(jù)庫對比確認屬于新發(fā)現(xiàn)單倍型；7個群體中，阿壩中蜂、滇南中蜂和海南中蜂遺傳多樣性水平較高，長白山中蜂遺傳多樣性水平較低，其他群體遺傳多樣性居中；不同種群間遺傳距離變化較大，其中海南中蜂與滇南中蜂、阿壩中蜂間的遺傳距離最大，長白山中蜂與云貴中蜂、北方中蜂、華南中蜂間的遺傳距離最??；聚類分析顯示7個種群可聚為4個類群。關(guān)鍵詞：東方蜜蜂；遺傳多樣性；線粒體關(guān)鍵詞：東方蜜蜂；遺傳多樣性；線粒體DNA

3、DNA中圖分類號：中圖分類號：文獻標志碼：文獻標志碼：AAnalysisAnalysisofofgeicgeicdiversitydiversityofofApisApisceranaceranapopulationspopulationsininChinaChinaRENQin1CAOLianfei2ZHAOHongxia3WANGRuisheng1CHENGShang1LUOWenhua1CAOLan1JIConghui1（1.Ch

4、ongQingAcademyofAnimalScience，Chongqing402460，China；2.ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences，Zhejiang310021，China3.GuangdongInstituteofAppliedBiologicalResourcesGuangdong510260China）Abstract:Abstract:ThemitochondrialDNAtR

5、NAleu～COIIgenesin7populationsofApisceranaFabriciusinChinawereamplifiedsequencedtheirgeicdiversityphylogeicrelationshipswereanalyzed.Theresultsshowedthatatotalof43haplotypeswereidentifiedofwhich10haplotypeswereidentifiedn

6、ewhaplotypesintheGenBankdatabaseAmong7populationsAbabeeHainanbeeYunnanbeehavehigherlevelofgeicdiversityChangbaiMountainbeehaslowerlevelofgeicdiversityotherpopulationswereintermediateThegeicdistancesbetweendifferentpopula

7、tionsvariedgreatlyofwhichHainanbeehavemaximumgeicdistancewithYunnanbeeAbabeeThegeicdistancesbetweenChangbaimountainbeeYunnanbeedleChinabeeNthernbeeSouthernbeeweresmall.Clusteranalysisshowedthatthe7populationscouldbeclust

8、eredinto4taxa.KeyKeywds:wds:ApisceranaFabriciusgeicdiversitymitochondrialDNA收稿日期：基金項目:國家蜂產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系基金項目（CARS45SYZ15）重慶市畜牧科學(xué)院基金項目(16421).作者簡介：任勤(1979)男寧夏固原人，助理研究員碩士研究生，主要從事蜜蜂方面的研究。通信作者：姬聰慧(1980)，女，河南平頂山人，助理研究員，碩士研究生。1.1.31.1.

9、3主要試劑主要試劑細胞組織基因組DNA提取試劑盒和蛋白酶K（北京百泰克生物技術(shù)有限公司）、dNTP、10Buffer、TaqDNA聚合酶和Marker（大連寶生物公司）、DNA凝膠回收試劑盒（愛思進生物技術(shù)有限公司）、引物（E25’GGCAGAATAAGTGCATTG3’，H25’CAATATCATTGATGACC3’）（上海生工生物工程有限公司合成）。1.21.2方法方法1.2.11.2.1基因組基因組DNADNA的提取的提取每個蜜蜂

10、樣本取1只工蜂進行試驗。取出被無水乙醇浸泡過的蜜蜂個體，在滅菌水中清洗3次，取蜜蜂胸部置于1.5mL的離心管中用小剪刀剪碎按照細胞組織基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)說明書提取基因組DNA?；蚪MDNA用TE溶解后于20℃保存，備用。1.2.21.2.2PCRPCR擴增與測序擴增與測序1.2.2.1反應(yīng)體系(50μL)模板DNA2μL，10Buffer(含Mg2)5μL，2.5mmolL1的dNTPs4μL，10pmolL1的引物各2

11、μL，5UTaq酶0.5μL，滅菌雙蒸水34.5μL。1.2.2.2反應(yīng)條件95℃預(yù)變性4min；94℃變性1min50℃退火1min72℃延伸1min共35個循環(huán)；72℃再延伸10min。PCR產(chǎn)物純化后使用測序儀（型號為ABIPRISM3730l）進行測序。1.2.31.2.3序列分析序列分析利用SeqMan程序?qū)y定獲得的序列進行校對，用MegAlign軟件比對所有序列。通過DnaSP5.0軟件輸出單倍型序列，同時計算各樣點的單倍

12、型多樣度（Hd）、平均核苷酸差異數(shù)（K）、核苷酸多樣度（Pi）。用MEGA3.1軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。2結(jié)果與分析結(jié)果與分析2.12.1PCRPCR擴增及測序結(jié)果擴增及測序結(jié)果所有樣本均成功進行了擴增和測序，擴增的片段大小約為450bp與目的片段大小一致，測序獲得序列長度約為400bp，擴增結(jié)果如圖1。1為空白對照，221為部分樣品的擴增結(jié)果，M為250bpPlusDNAMarker1:blankcontrol221:Amplificat