基于AFLP和SSR分子標(biāo)記的中國楊梅遺傳多樣性分析.pdf

1、楊梅(Myricarubra Sieb.&Zucc.)原產(chǎn)于中國，是我國南方著名特產(chǎn)果樹，其栽培歷史悠久，種質(zhì)資源豐富，目前楊梅產(chǎn)業(yè)已進(jìn)入快速發(fā)展期。 本研究旨在從DNA分子標(biāo)記水平上探討中國楊梅種質(zhì)資源的遺傳多樣性和親緣關(guān)系，為有效保護(hù)楊梅種質(zhì)資源和進(jìn)行種質(zhì)資源創(chuàng)新利用提供理論依據(jù)，主要研究結(jié)果如下： 1.基于AFLP標(biāo)記技術(shù)的楊梅遺傳多樣性分析針對楊梅葉片富含多糖和多酚類等次生物質(zhì)的特點(diǎn)，用CsCl超速離心法對楊梅基

2、因組DNA進(jìn)行純化，對AFLP-銀染技術(shù)體系進(jìn)行了優(yōu)化改進(jìn)，建立了楊梅AFLP-銀染技術(shù)體系，并篩選出6對選擇性引物組合：EAA/M47、EAA/M54、EAC/M56、EAC/M50、EAG/M51和EAT/M61；這6對AFLP引物組合在101個供試楊梅材料中分別產(chǎn)生34，35，45，37，44，41個位點(diǎn)，總計獲得236個位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)177個，每對引物的多態(tài)性比率在64.86-86.67％之間，平均多態(tài)性比率為75.01％

3、；6對AFLP引物組合的香農(nóng)指數(shù)I在0.21-0.36之間，基因多樣性指數(shù)He在0.1332-0.2464之間，揭示了楊梅種質(zhì)資源豐富的遺傳多樣性；對AFLP擴(kuò)增結(jié)果采用UPGMA法進(jìn)行聚類分析，可以把101個楊梅材料分為5組，第1組有29個材料，包括浙江的水晶種、荸薺、東魁和廣東烏西梅、廣東早梅、廣東黑梅等材料；第2組有63個材料，包括浙江的早薺蜜梅、晚薺蜜梅，湖南的桐子梅、江蘇的大浮大葉細(xì)蒂大浮、大浮小葉細(xì)蒂和烏梅；第3組有7個材料

4、，包括浙江的6個材料和江蘇的大浮烏梅；第4組只有1個浙江杭州的大葉黃；第5組為1個美國楊梅(MyricaceriferaL.)。聚類結(jié)果與地域來源并不完全一致，同時也與果實(shí)色澤及植株性別不一致，反映出在楊梅悠久的栽培歷史中存在著普遍的種質(zhì)資源交流。 2.楊梅EST-SSR信息分析與SSR標(biāo)記開發(fā)數(shù)量迅速增加的EST為開發(fā)新的SSR標(biāo)記提供了寶貴的資源，本研究從課題組提供的395條楊梅Unigene序列中查找出21條符合篩選條件E

5、ST含有SSR，占EST序列總數(shù)的5.31％，在21條序列中，以二核苷酸為重復(fù)單元的序列最多，為12條，占57.14％，其次是三核苷酸重復(fù)類型，有5條，占全部SSR的23.81％；其它重復(fù)類型所占比例均不足20％，包括2條四核苷酸重復(fù)和2條六核苷酸重復(fù)。 另外，在相關(guān)試驗中還發(fā)現(xiàn)兩條與MYB轉(zhuǎn)錄因子有關(guān)的序列中含有SSR。通過設(shè)計SSR引物，在優(yōu)選的PCR反應(yīng)體系下，對SSR位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有11個位點(diǎn)呈現(xiàn)多態(tài)性，

6、其等位基因數(shù)(A)為3到12，觀察到的雜合度(Ho)從0.1250到0.9667，期望雜合度(HE)從0.2359到0.8790，多態(tài)性信息含量(PIC)從0.2285到0.8516。以上結(jié)果說明所開發(fā)的11個SSR標(biāo)記能很好的運(yùn)用于楊梅遺傳多樣性分析等相關(guān)方面的研究。 3.基于SSR標(biāo)記技術(shù)的楊梅遺傳多樣性分析本研究利用11個SSR標(biāo)記，選擇100個楊梅材料進(jìn)行遺傳多樣性分析，每對SSR引物在100個楊梅材料中分別產(chǎn)生6-15

7、個多態(tài)性位點(diǎn)，總共122個多態(tài)性位點(diǎn)，平均每對引物擴(kuò)增出11個多態(tài)性位點(diǎn)。將11個SSR標(biāo)記在100個楊梅材料上的擴(kuò)增結(jié)果，進(jìn)行UPGMA法聚類分析，結(jié)果也可以把100個楊梅材料分為5組，第1組包括晚稻楊梅、水晶種、荸薺、甬選56號、桐子梅等56個材料；第2組包括東魁、晚薺蜜梅等33個材料；第3組包括江蘇的桃紅、廣東早梅、廣東黑梅、廣東大梅、湖南的墻背梅5個材料；第4組包括4個浙江材料和1個貴州材料；第5組為1個美國楊梅(Myricac