中國黑木耳主要栽培菌株分子指紋分析.pdf

1、開展我國黑木耳主要栽培菌株分子指紋分析研究，客觀評價我國黑木耳栽培菌株種質(zhì)資源的遺傳多樣性，掌握不同栽培菌株的鑒別方法，是充分保護(hù)和利用黑木耳種質(zhì)資源，開展黑木耳良種選育，保護(hù)黑木耳品種知識產(chǎn)權(quán)，加強(qiáng)黑木耳菌種質(zhì)量管理的基礎(chǔ)。本研究從全國范圍內(nèi)收集了黑木耳34個主要栽培菌株，應(yīng)用同工酶技術(shù)和DNA標(biāo)記技術(shù)（ISSR、SCAR和SRAP）進(jìn)行了栽培菌株分子指紋分析。主要研究結(jié)果如下： 1.34個供試栽培菌株的酯酶同工酶分析結(jié)果，共

2、檢測到了113條酯酶同工酶譜帶，各個菌株具有2～6條不等的酶帶數(shù)，多數(shù)為2～4條，共有20個酶譜類型，其中部分菌株之間的酶譜相同。聚類分析結(jié)果，在71％的相似水平時，供試的34個菌株可以歸為3大類。部分菌株之間相似系數(shù)甚至為1.0，顯示它們親緣關(guān)系很近，這些菌株可能為同物異名，需要從多個方面予以比較鑒別。 2．在對擴(kuò)增體系進(jìn)行正交優(yōu)化的基礎(chǔ)上，應(yīng)用篩選出的13個多態(tài)性引物對34個菌株基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，共產(chǎn)生129條DNA帶，

3、96.9％呈現(xiàn)多態(tài)性，平均每個引物擴(kuò)增出9.9條帶。從129條DNA帶中選擇32個最佳的ISSR標(biāo)記譜帶，構(gòu)建了34個供試菌株的ISSR指紋圖譜模式圖，并將其計算機(jī)化。試驗表明ISSR標(biāo)記技術(shù)可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地應(yīng)用于黑木耳栽培菌株的鑒別。 3．對ISSR擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析獲得6個菌株的8條特異性條帶，將其中分別來自供試菌株173（引物P4）和186（引物P16）的2條特異性帶，通過回收克隆并測序，應(yīng)用軟件Primer Prem

4、ier5.0設(shè)計SCAR標(biāo)記引物對，成功地將它們轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記，用于對菌株173和186進(jìn)行特異性鑒定。這些SCAR標(biāo)記的建立，為黑木耳栽培菌株的鑒定提供了準(zhǔn)確可靠和迅捷方便的新途徑。 4．利用11對SRAP引物組合對34個菌株基因組進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出154條DNA帶，其中具有多態(tài)性帶148條，占總帶數(shù)的96.1％，平均每組合引物擴(kuò)增出14.0條帶，顯示出比較高的多態(tài)比率。聚類分析結(jié)果在一定程度上與ISSR標(biāo)記基本一致，表明

5、SRAP標(biāo)記也可以作為黑木耳菌株分子指紋分析的有效技術(shù)手段。 5．兩種DNA指紋分析結(jié)果表明，在一定相似水平上，34個菌株可聚為三大類：第一大類栽培菌株主要從東北地區(qū)收集，還包括河南和北京的少量菌株；第二大類主要是長江流域及其以南地區(qū)收集的菌株，但亦包含來自北方的部分菌株；第三大類主要包括菌株9809、139和8129。該結(jié)果一方面表明我國黑木耳栽培菌株引種頻繁，另一方面也表明我國黑木耳栽培菌株可能主要來自于野生菌株馴化，東北地