多胺在石刁柏體細胞胚胎發(fā)生中的作用研究.pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文多胺在石刁柏體細胞胚胎發(fā)生中的作用研究姓名：陳小飛申請學位級別：碩士專業(yè)：植物學指導教師：肖浪濤20050601S t u d y o n P o l y a m i n e sA s p a r a g u s R o l e s i n S o m a t i c E m b r y o g e n e s i s i n ( A s p a r a g u s o f i c i n a l

2、i s L . )Ab s t r a c tT h e p h y s i o l o g i c a l a n d b i o c h e m i c a l c h a n g e s w e r e s t u d i e d d u r i n g s o m a t i ce m b r y o g e n e s i s i n A s p a r a g u s ( A s p a r a g

3、u s o fc i n a l i s L . c v U C 8 0 0 ) , a n d r o l e s o fp o l y a m i n e s o n s o m a t i c e m b r y o g e n e s i s a n d t h e m e c h a n i s m w e r e i n v e s t i g a t e d .1 . T h e c o

4、n d i t i o n s f o r s o m a t i c e m b r y o g e n e s i s i n A s p a r a g u s w e r e o p t i m i z e d . T h e m o s ts u i t a b l e m e d i u m w e r e : M S + N A A l m g “ L - ' + B A 0 . 5

5、m g “ L ' ' + 2 , 4 - D 2 m g “ L “ f o r p r i m a r yc a l l u s i n d u c t i o n a n d M S + 2 , 4 - D 1 0 m g · L “ ' + N A A 0 . 5 m g · L ' ' f o r e m b r y o g e n i c

6、c a l l u si n d u c t i o n . Wh i t i s h - y e l l o w , b r i g h t , f r e s h , i n c o m p a c t a n d c o i n c i d e n t p a r t i c l e e m b r y o g e n i cc a l l i w e r e o b t a i n e d o n m e

7、 d i u m s u p p l e m e n t e d w i t h 1 0 m g · L ' ' p u t r e s c i n e . E m b r y o g e n i cc a l l i c a n b e i n d u c e d w i t h i n 7 0 d a y s , a n d c a l l i n e e d b e t

8、r a n s f e r e d t o f r e s h m e d i u m w i t h i n6 0 d a y s f o r s u b c u l t u r e . P h y t o h o r m o n e s f r e e m e d i u m w a s u s e d t o i n d u c e s o m a t i ce m b r y o i d . E

9、m b r y o g e n i c c e l l m a s s f o r m e d i n t h e 7 - 8 t h d a y a n d g l o b u l a r e m b r y o ,p e a r - s h a p e d e m b r y o i n t h e 1 0 - - 1 4 “ ' d a y , c l u b - s h a p e d e

10、 m b r y o i n t h e 2 1 0 ' d a y a n db a n a n a - s h a p e d e m b r y o i n t h e 2 8 - 3 0 ' h d a y .2 . M e d i u m M S + 2 , 4 - D I O m g · L - ' + N A A 0 . 5 m g · L '

11、; ' + P u t 1 0 m g · L “ ' w a s u s e d t oi n d u c e d e m b r y o g e n i c c a l l u s f r o m p r i m a r y c a l l u s , a n d e m b r y o g e n i c c a l l u s s u b c u l t u r e d o

12、 ni t m a i n t a i n e d h i g h e m b r y o g e n e s i s c o m p e t e n c e a f t e r s u b c u l t u r i n g 4 t i m e s . T h a t i n d i c a t e dt h a t p u t r e s c i n e e f e c t e d o n c a l l

13、 u s e m b r y o g e n i c c o m p e t e n c e c o n t a i n i n g i n s o m e c e r t a i ne x t e n t3 . T h e e n d o g e n o u s p h y t o h o r m o n e s a n d p o l y a m i n e s l e v e l s o f c u l

14、 t u r e s i n d i f e r e n tp h a s e w e r e d e t e r m i n e d b y m e a n s o f H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y ( H P L C ) ,a n d t h e r e s u l t s i n d i c

15、a t e d t h a t I A A l e v e l r a i s e d r a p i d l y a f t e r p r i m a r y c a l l i t r a n s f o r m e d t oe m b r y o g e n i c c a l l u s i n d u c t i o n m e d i u m . B o t h I A A a n d

16、G A 3 m a i n t a i n e d h i g h l e v e l w h e ne m b r y o g e n i c c a l l u s e m e r g e d , w h i c h s u g g e s t e d t h a t h i g h l e v e l o f I A A + G A 3 w a s r e l a t e dt o e m b r

17、y o g e n i c c a l l i e m e r g i n g . P u t r e s c i n e w a s t h e p r e d o m i n a n t t y p e e n d o g e n o u sp o l y a m i n e s d u r i n g t h e i n d u c t i o n o f e m b r y o g e n i c c

18、 a l l u s . A n d h i g h p u t r e s c i n e c o n t e n tm a i n t a i n e d u n t i l e m b r y o g e n i c c a l l i f o r m e d , w h i l e t h e c o n t e n t s o f S p d a n d S p m w e r e l o w