玉米大斑病菌MAPK基因的克隆和功能分析.pdf

1、該論文在系統(tǒng)研究MAPK途徑在玉米大斑病菌生長、發(fā)育、侵染和毒素產(chǎn)生等方面調(diào)控作用的基礎上,獲得了115個MAPK途徑調(diào)控基因的表達基因片段,并克隆了1個玉米大斑病菌MAPK基因----STKl基因.1、建立了一套切實可行的檢測MAPK活性的熒光素酶/熒光素技術體系,并發(fā)現(xiàn)MAPK途徑抑制劑U0126和CaM抑制劑TFP對MAPK活性都有顯著的抑制作用.2、玉米大斑病菌的分生孢子的水懸浮液和PD懸浮液在玻璃平板上12h以內(nèi)、在玉米葉片的

2、上表面和下表面24h以內(nèi)都可以產(chǎn)生成熟的附著胞,在葉片上附著胞和侵入絲的產(chǎn)生時間晚于玻璃平板,產(chǎn)生數(shù)量也少于玻璃平板.3、在PDA培養(yǎng)基上,U0126對玉米大斑病菌、玉米黃斑病菌、小麥根腐病菌等10種植物病原真菌的菌落形態(tài)和生長速度沒有顯著影響,可以形成正常的菌絲、分生孢子,但U0126處理的玉米大斑病菌分生孢子萌發(fā)時間晚,芽管短,分生孢子的萌發(fā)百分率下降.4、U0126和TFP單獨或混合處理對玉米大斑病菌附著胞產(chǎn)生都有一定的抑制作用,

3、抑制作用隨著濃度增而增強,隨處理時間延長而減弱.但加入cAMP后,它們的抑制作用消失,從而表明,MAPK途徑與Ca<'2+>-CaM途徑和cAMP途徑間即有協(xié)同作用,又相互影響,它們之間組成一個復雜的信號網(wǎng)絡調(diào)控玉米大斑病菌的分生孢子和附著胞發(fā)育.5、U0126處理后,玉米大斑病菌HT-毒素的組成及活性都發(fā)生了變化,部分組分的產(chǎn)生受到了抑制,并誘導產(chǎn)生了一些新的毒素組分.抑制劑濃度不同,新組分的種類和含量不同.6、在含有少量離子的蒸餾水

4、中,U0126對菌絲的細胞膜透性和PAL活性沒有顯著影響,但POD和PPO活性變化明顯,推測U0126對病菌細胞可能沒有直接的毒害作用,而與病菌的活性氧代謝有關.8、利用DDRT-PCR和反式Northern雜交技術,獲得了115條特異于U0126處理的差異表達基因片段,對4個差別表達基因片段進行克隆并測序,獲得了長度分別為296bp、333bp、479bp和601bp的4條cDNA序列.9、利用巢式PCR和RACE技術獲得了1個玉米大

5、斑病菌MAPK同源基因-STKl基因的cDNA序列、部分基囚組序列及其兩側(cè)序列,在基因內(nèi)部存在3個內(nèi)含子.該基因含有MAPK、Ser/Thr蛋白激酶、JNK(Jun-N-terminal kinase)等同源結(jié)構(gòu)域,與許多真菌和動物中與應激反應和致病性有關的MAPK蛋白有較近的親緣關系和較高的同源性,在基因組中主要以單拷貝形式存在,發(fā)現(xiàn)多數(shù)供試菌株中都含有STK1基因,但菌株間既具有較強的保守性,又存在一定的序列差異.10、30μM U