玉米大斑病菌StMKK1基因的結(jié)構(gòu)分析及功能研究.pdf

1、分類號：豎蘭5：!三!密級：公玨單位代碼：!QQ逝學號：2Q!圣2Q墨QQ壘2玉米大斑病菌StMKKl基因的結(jié)構(gòu)分析及功能研究StructuralAnalysisandFunctionStudyofStMKKlGeneinSetosphaeriaturcica學位申請人：薛韶娜指導教師：谷守芹教授董金皋教授學科專業(yè)：植物學學位類別：理學碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學答辯日期：二。一六年五月三十日摘要lIIIIIIIIIIIIIIIIIIII

2、IllllIIlY3100909本課題組在前期研究中利用生物信息學技術(shù)對玉米大斑病菌基因組數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)，在玉米大斑病菌中存在CWIMAPK級聯(lián)途徑，但其功能尚不清晰。本研究擬在此基礎(chǔ)上，利用生物信息學技術(shù)分析該級聯(lián)途徑的關(guān)鍵基因StMKKI(MAPKK)的結(jié)構(gòu)特征，并利用靶基因敲除技術(shù)明確該基因的功能。該研究不僅可明確玉米大斑病菌StMKKI基因的功能，也可為闡明CWI—MAPK級聯(lián)途徑的功能奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1采用DNAs

3、tar、DNAMAN本地軟件和NCBI網(wǎng)站在線軟件BLAST分析了StMKKl基因的結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)該基因具有MAPKK類基因的STKc保守結(jié)構(gòu)域；聚類分析發(fā)現(xiàn)，StMKKl基因與釀酒酵母中的MKKl基因有具有較近的親緣關(guān)系，表明玉米大斑病菌StMKKJ屬于MKKl1ike基因。2利用聚乙二醇(PEG)介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法創(chuàng)制StMKKl基因敲除突變體，通過潮霉素B抗性篩選、特異引物PCR及RTPCR驗證，篩選得到了2株StMKKl基因敲除

4、突變體，分別命名為z3StMKK，一J『和厶StMKKl2。3與野生型菌株相比較，StMKKl基因敲除突變體生長速度明顯下降，不產(chǎn)生分生孢子，表明StMKKl基因參與調(diào)控病菌菌落的生長及分生孢子發(fā)育。4與野生型相比，StMKKl基因敲除突變體對細胞壁合成抑制劑剛果紅、CFW、SDS的敏感性降低，且突變體的細胞壁疏水性降低，表明StMKKl基因影響病菌的細胞壁發(fā)育。5在鹽脅迫條件下，StMKKl基因敲除突變體菌落生長抑制率與野生型菌株沒有