能量可控陡脈沖對人卵巢癌SKOV3細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響及其相關(guān)機制的研究.pdf

1、陡脈沖電場對細胞膜的不可逆性擊穿導(dǎo)致腫瘤細胞死亡的原理使其有可能成為惡性腫瘤低創(chuàng)或微創(chuàng)物理治療的新方式。本課題組在前期研究中已證實能量可控陡脈沖能有效的殺死腫瘤細胞，但在實驗中也發(fā)現(xiàn)由于脈沖電場隨著距離的增加而減弱，因此在治療的腫瘤組織的周邊存在著殘留的腫瘤細胞。這些殘留的腫瘤細胞生物學(xué)行為是否有變化，其侵襲轉(zhuǎn)移能力是否可能變化；這對于能否將能量可控陡脈沖安全地用于臨床具有重要意義。本實驗研究旨在用能量可控陡脈沖作用后的腫瘤細胞作為殘留

2、腫瘤細胞的實驗?zāi)Ｐ蛠硌芯繗埩裟[瘤細胞的生物學(xué)行為變化，尤其是其侵襲轉(zhuǎn)移能力的變化。 第一部分：能量可控陡脈沖對人卵巢癌SKOV3細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響 目的：觀察能量可控陡脈沖對人卵巢癌細胞SKOV3侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響；分析不同劑量的能量可控陡脈沖對SKOV3侵襲、轉(zhuǎn)移能力的影響及其相關(guān)性；尤其是亞致死劑量下SKOV3細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的變化。 方法：體外培養(yǎng)SKOV3細胞，將細胞分為七組；以假電擊組作為陰性對

3、照組，秋水仙堿處理組、5-氟尿嘧啶處理組、秋水仙堿和5-氟尿嘧啶聯(lián)合處理組作為陽性對照組，用三種不同劑量的能量可控陡脈沖處理細胞。用機械法測定細胞粘附能力；用Transwell小室分別測定SKOV3細胞的體外侵襲、趨化運動能力。用倒置顯微鏡觀察Transwell小室背面的細胞數(shù)并分區(qū)計數(shù)細胞個數(shù)；取下小室的膜做蘇木素一伊紅(Haematoxylin and Eosin，HE)染色，在光鏡下計數(shù)小室背面的細胞數(shù)。 結(jié)果：秋水仙堿和

4、5-氟尿嘧啶聯(lián)合處理組細胞的侵襲、運動現(xiàn)象完全消失，5-氟尿嘧啶處理組細胞的作侵襲、趨化運動而到達膜背面的數(shù)量未見明顯降低；秋水仙堿處理組及三種不同劑量的能量可控陡脈沖處理組的細胞侵襲、趨化運動而到達膜背面的的數(shù)量較陰性對照組有降低，差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：能量可控陡脈沖能夠降低SKOV3細胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力；其降低SKOV3細胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力與其劑量有相關(guān)性。 第二部分：能量可控陡脈沖對人卵巢癌細胞SKOV

5、3細胞骨架作用的實驗研究 目的：探討能量可控陡脈沖對人卵巢癌細胞SKOV3細胞骨架的影響。 方法：將SKOV3細胞分成5組，用不同參數(shù)處理，并用經(jīng)秋水仙堿處理的SKOV3細胞作為陽性對照組；以未經(jīng)處理的假電擊組作為陰性對照組。以羅丹明．鬼筆環(huán)肽直接標(biāo)記微絲，以免疫熒光法標(biāo)記微管，用共聚焦熒光顯微鏡觀察。制作電鏡標(biāo)本，用電子顯微鏡觀察細胞骨架的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：免疫熒光圖像結(jié)果表明，能量可控陡脈沖作用的SKOV3細

6、胞喪失正常的細胞骨架網(wǎng)絡(luò)；微絲明顯解聚、骨架蛋白彌散分布、細胞骨架的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)消失；微管解聚，偽足減少且其中的微絲明顯解聚，排列紊亂，結(jié)構(gòu)消失。而且這一作用與劑量呈正相關(guān)。 結(jié)論：能量可控陡脈沖對人卵巢癌細胞SKOV3細胞骨架有明顯的作用，可以使微絲和微管解聚，細胞的偽足減少，細胞骨架的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)消失。 第三部分：能量可控陡脈沖對卵巢癌基質(zhì)金屬蛋白酶9及其抑制物1蛋白表達的調(diào)控 目的：基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)與金屬

7、蛋白酶組織抑制物(TIMPs)之間活性的平衡調(diào)節(jié)破壞是導(dǎo)致腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的主要原因。研究表明高強度陡脈沖對腫瘤有殺傷和抑制作用，但是否能調(diào)控卵巢癌細胞MMPs及TiMPs蛋白的表達，目前尚不明確。本實驗的目的在于觀察能量可控陡脈沖對卵巢癌細胞MMPs及TIMPs蛋白的表達的影響。 方法：以卵巢癌裸鼠皮下移植瘤為模型，隨機分為實驗組和對照組，采用高強度脈沖電場，電壓1000V、頻率1000Hz、脈寬250ns于卵巢組織5min

8、，免疫熒光法檢測陡脈沖作用后卵巢癌細胞MMP-9及TIMP-1蛋白表達的變化。 結(jié)果：對照組卵巢癌組織MMP-9及TIMP-1免疫熒光強度分別為140.21±5.16和74.98±3.14，兩者比例為1.87。陡脈沖作用于卵巢癌組織后，細胞結(jié)構(gòu)保持完整，MMP-9顯著降低，熒光強度50.37±2.61，而。TIMP-1表達明顯增加，熒光強度116.40±4.70，比例倒置。與對照組比較，兩種蛋白表達差異均有顯著性(P<0.05)