卵巢癌SKOV3中Holoclone細胞的特性及其形成血管生成擬態(tài)的能力.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾， j ∞《‘。?！坻D麓謄僦獬耙陽麟：鬃伊學(xué)藝囂黔；．- ' J ：i L 醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負。研究生簽名：棲豆芴 翩瀨枷 W ∥年≥傭≯；日中文摘要卵巢癌S K O V 3 中H o l

2、 o c l o n e 細胞的特性及其形成血管生成擬態(tài)的能力摘 要目的：血管生成擬態(tài)( v a s c u l o g e n i cm i m i c r y ，V M ) 是高侵襲性的腫瘤細胞所具有的自我血供的微循環(huán)結(jié)構(gòu)，利用人卵巢上皮性癌細胞株S K O V 3 分離培養(yǎng)3 種不同形態(tài)的單細胞克隆，比較其體內(nèi)成瘤能力及體外克隆形成能力，并計算克隆形成率( c o l o n yf o r m i n ge f f i c i e

3、 n c y , C F E ) ；觀察其形成V M 的能力；并檢測腫瘤干細胞標(biāo)記物C D l 3 3 和基質(zhì)金屬蛋白酶( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s ，M M P ) ．2 、M M P ．9 的表達水平。方法：1 通過有限稀釋法對S K O V 3 進行單細胞培養(yǎng)形成3 種不同形態(tài)的單細胞克隆：全克隆( h o l o c l o n e ) 、部分克隆( m e r

4、 o c l o n e ) 、亞克隆( p a r a c l o n e ) ；H o l o c l o n e 細胞緊密排列體積小，圓形或橢圓形，具有連續(xù)傳代、無限增殖等干細胞特性；P a r a c l o n e 細胞形狀不規(guī)則，松散，可能為終末分化細胞；M e r o c l o n e 介于h o l o c l o n e 和p a r a c l o n e 之間。取對數(shù)生長期的S K O V 3細胞，用梯度倍數(shù)稀釋

5、的原則，將細胞懸液連續(xù)倍數(shù)稀釋至極低密度( 每個9 6 孔板中含0 ．5 - 1 個細胞) 。次日，挑選并標(biāo)記只含1 個細胞的孔；培養(yǎng)1 0 一1 4 天后孔中即形成較大克隆，區(qū)分并標(biāo)記各種形態(tài)不同的細胞克隆。繼續(xù)培養(yǎng)進行細胞后續(xù)實驗。實驗重復(fù)3 次。2 體內(nèi)成瘤能力的試驗：將3 0 只雌性裸鼠( B A L B ／c ．n u ) 隨機分成3組分別接種3 種不同形態(tài)的細胞。無菌條件下，將h o l o c l o n e 細胞計數(shù)1

6、0 0 0個，m e r o c l o n e 細胞和p a r a c l o n e 細胞計數(shù)分別為l ×1 0 5 個，分別重懸于0 ．2 m lP B S 中，接種于裸鼠右側(cè)大腿皮下，觀察裸鼠皮下成瘤情況。實驗重復(fù)3 次。3 軟瓊脂克隆形成實驗：制各單細胞懸液，將h o l o c l o n e ，m e r o c l o n e ，p a r a c l o n e 分別接種在軟瓊脂上，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2 ～3 周