水稻鐵超氧化物歧化酶基因及其啟動子的克隆和功能研究.pdf

1、植物受到逆境影響時體內產生大量活性氧，超氧化物歧化酶(SOD)是廣泛存在于需氧生物中能夠催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應、專一地清除生物體內的活性氧、平衡機體的氧自由基的一種重要的金屬抗氧化酶。它也是活性氧清除系統(tǒng)中第一個發(fā)揮作用的抗氧化酶。　　本研究以水稻廣親和品種Cpslo17為材料，以λTriplex2TM為載體利用SMART技術構建了幼葉和幼穗兩種組織的cDNA噬菌體文庫。幼葉和幼穗原始文庫的克隆數(shù)目為別為1.5×105pfu和2.

2、45×105pfu，插入片段的大小均在0.5～3kb之間，文庫的陽性克隆子的比例分別為97.0％和98.7％。從幼穗cDNA文庫中分離了一個新的水稻鐵超氧化物歧化酶剪接異構體OsFe-SODb。它編碼的氨基酸和其它植物的OsFe-SOD同源性為33.9～45.4％，并且在其N端發(fā)現(xiàn)有定位于葉綠體的信號肽。序列分析表明OsFe-SODb和Kaminaka等分離的OsFe-SODa是由同一段基因組經(jīng)過不同剪接而形成的剪接異構體。水稻兩個亞種

3、的OsFe-SOD基因組序列一致，所有外顯子和內含子的交接區(qū)都符合“GT-AG”’規(guī)則?？勺兗艚影l(fā)生在OsFe-SOD的第四個外顯子處，屬于內含子不剪接的類型。可變剪接導致第169位氨基酸后面的氨基酸序列的改變。　　分別將OsFe-SODa和OsFe-SODb的讀碼框插入pET-11a在大腸桿菌BL21(DE3)中進行了非融合高效表達，優(yōu)化表達體系發(fā)現(xiàn)25℃下目的蛋白主要以可溶性形式表達。SOD活性檢測表明兩種水稻鐵超氧化物歧化酶異構