參知健腦片組分配伍對(duì)擬阿爾茨海默病細(xì)胞模型的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的： 依據(jù)阿爾茨海默病(AD)發(fā)病機(jī)理中的“A β級(jí)聯(lián)假說”，從A β產(chǎn)生的氧化損傷毒性的環(huán)節(jié)的各個(gè)靶點(diǎn)入手，并與神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)肽APP17進(jìn)行對(duì)比，探討參知健腦方組分對(duì)A β的神經(jīng)元毒性的保護(hù)作用。 方法： 1．選擇參知健腦方組成中藥的有效組分(即人參皂昔Rgl、知母皂苷元Sar、芍藥苷Pae)，首先利用細(xì)胞毒性試驗(yàn)確定各組分有效且無(wú)毒的作用濃度，再利用正交設(shè)計(jì)的方法，將各個(gè)濃度按不同配比組合，通過對(duì)正常SH-Y5

2、Y細(xì)胞和擬AD細(xì)胞模型SH-Y5Y細(xì)胞增殖率的觀察，比較各組配比組合后對(duì)細(xì)胞增殖率的影響，篩選出最佳配比組合用于下一步實(shí)驗(yàn)。 2．用25μmol/L的Aβ25-35孵育SH-Y5Y細(xì)胞復(fù)制AD細(xì)胞模型，分別在6h、24h、48h、72h觀察β淀粉樣蛋白對(duì)于細(xì)胞的活性和存活率、乳酸脫氫酶的釋放量、細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生量、細(xì)胞周期的變化、細(xì)胞凋亡率的變化及6h和24h細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的凋亡相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-

3、3的變化來(lái)觀察A β產(chǎn)生的神經(jīng)毒性的作用，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別給予中藥有效組分配伍和APF17肽10μmol·L<'-1>，通過與模型組對(duì)比觀察對(duì)A β產(chǎn)生的細(xì)胞毒性的抑制作用。 結(jié)果： 1．人參皂苷、知母皂苷元、芍藥苷三種組分對(duì)細(xì)胞有增殖作用且無(wú)毒的作用濃度分別是人參皂苷(1.5625，3.1256，6.25μg·mL<'-1>)知母皂苷元(6.25，12.5，25 μg·mL<'-1>)，芍藥苷(6.25，12.5，25

4、μ g·mL<'-1>). 2. 利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)所得的最佳配比是(人參皂苷1.5625μg·mL<'-1>，知母皂苷元6.25μg·mL<'-1>，芍藥苷6.25μg·mL<'-1>)。 3．Aβ作用細(xì)胞后，細(xì)胞的存活率在隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)出了下降的趨勢(shì)，與此相應(yīng)，細(xì)胞的LDH釋放量表現(xiàn)為隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加的趨勢(shì)。參知健腦方組分組對(duì)細(xì)胞的存活率有一定的提高作用，對(duì)LDH釋放量起到了一定的抑制作用，與APP1

5、7肽組比較無(wú)顯著性差異。 4．細(xì)胞的凋亡率在6h開始升高，至24h達(dá)峰值，此后凋亡率又逐漸降低，但與正常對(duì)照組始終差異顯著。細(xì)胞周期表現(xiàn)為細(xì)胞被阻抑于G0-G1期的比例增加，S期的比例下降。參知健腦方組分組對(duì)細(xì)胞的凋亡率有一定的抑制作用，能促進(jìn)細(xì)胞周期S期的比例增加，與APP17肽組比較無(wú)顯著性差異。 5．細(xì)胞內(nèi)的活性氧隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加，參知健腦方組分組表現(xiàn)出了一定的抑制作用，與APP17肽組比較無(wú)顯著性差異。