安胃瘍膠囊治療慢性淺表性胃炎藥效學(xué)試驗及機(jī)制研究.pdf

1、1、目的與意義
　　 慢性淺表性胃炎(CSG)由各種不同病因引起的胃黏膜病變，以胃黏膜層中漿細(xì)胞及淋巴細(xì)胞等慢性炎癥細(xì)胞浸潤為主要表現(xiàn)，不伴有胃黏膜的萎縮性改變。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，慢性淺表性胃炎發(fā)病率居各種胃腸病之首，占慢性胃炎(CG)病發(fā)率的51.7％～85.45％，是臨床上最多見的慢性胃炎及胃腸疾病，同時，其發(fā)病率隨年齡的增長而增加且復(fù)發(fā)率高，目前尚無特效的治療方法。國內(nèi)外大多數(shù)學(xué)者認(rèn)同本疾病發(fā)展模式為“慢性淺表性胃炎-慢性萎

2、縮性胃炎—胃黏膜萎縮—腸上皮化生—異型增生—胃癌”。1978年WHO就將慢性萎縮性胃炎列為胃癌的癌前狀態(tài)，在此基礎(chǔ)上伴發(fā)有不完全腸腺化生(IM)和（或）中、重度不典型增生(ATP)則被視為癌前病變，故慢性淺表性胃炎的有效治療對消化道癌癥的預(yù)防、診治也均有重要意義。
　　 安胃瘍膠囊是以甘草提取物-甘草總黃酮為主要成分的中藥制劑（中藥新藥5類，國藥準(zhǔn)字Z10970059），臨床上主治胃及十二指腸球部潰瘍，并可用于潰瘍愈合后的維持治

3、療，有補中益氣，解毒生肌之功效。在多年的臨床實踐中，安胃瘍膠囊也被用于治療慢性淺表性胃炎，并取得較好的療效，但實驗室藥效學(xué)評價尚不明確。本課題采用低濃度氨水自由飲用配合饑飽失常刺激制備大鼠慢性淺表性胃炎模型，并在此基礎(chǔ)上開展安胃瘍膠囊治療慢性淺表性胃炎藥效學(xué)評價并探討其相關(guān)作用機(jī)制的試驗研究。
　　 2、實驗方法
　　 2.1大鼠慢性淺表性胃炎模型的制備及安胃瘍膠囊藥效學(xué)評價
　　 采用0.02％氨水自由飲用，同

4、時配合饑飽失常（1天禁食，2天飽食）復(fù)制大鼠慢性淺表性胃炎模型，以胃組織病理學(xué)檢查結(jié)果作為模型復(fù)制成功的判定標(biāo)準(zhǔn)。慢性淺表性胃炎模型大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組后連續(xù)灌胃30天，以動物一般體征、胃黏膜損傷狀況、胃組織病理學(xué)檢查（HE染色、掃描電鏡）、胃黏膜上皮細(xì)胞粘蛋白分泌功能、胃微循環(huán)血流量、胃腸激素分泌功能等作為藥效學(xué)評價指標(biāo)。
　　 2.2安胃瘍膠囊治療慢性淺表性胃炎的機(jī)制研究
　　 實驗周期結(jié)束，elisa測定血清中IL-1

5、β、IL-8及PGE2含量，同時，流式細(xì)胞儀測定EDTA抗凝全血中CD3+、CD4+、CD8+含量及百分率。
　　 2.3安胃瘍膠囊抗炎作用
　　 2.3.1醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加實驗
　　 各組小鼠灌胃相應(yīng)藥物，其中模型對照組給予水。小鼠給藥30min后，尾靜脈注射0.5％伊文思藍(lán)溶液(0.1ml/10g)，隨即腹腔注射0.6％的冰醋酸溶液(0.1ml/10g)，20min后頸椎脫臼處死和腹腔注射5

6、ml生理鹽水并輕揉小鼠腹部，使腹腔內(nèi)染料充分溶于生理鹽水中并混合均勻。然后剪開小鼠腹部肌肉，吸出腹腔洗滌液4ml并用生理鹽水定容至10ml，3000rpm/min離心15min，取上清液在紫外分光光度計595nm處測定其吸光度(OD)值。
　　 2.3.2角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹實驗
　　 實驗前在大鼠左踝關(guān)節(jié)上用標(biāo)記筆做測定標(biāo)記線并測定其致炎前容積（兩次測定取平均值）。測定結(jié)束，由左后腳掌腱膜下向踝關(guān)節(jié)周圍注射1％角叉

7、菜膠（0.1ml/只），隨即灌胃給予藥液。在致炎給藥后30min、60min、90min時，測定足趾容積值，按下列公式計算腫脹率。腫脹率(％)=（致炎后容積-致炎前容積）/致炎前容積×100％
　　 2.4安胃瘍膠囊鎮(zhèn)痛作用評價
　　 2.4.1醋酸所致小鼠扭體實驗
　　 各組動物灌胃相應(yīng)藥物，其中模型對照組給予水。小鼠給藥后30min時，腹腔注射0.6％醋酸溶液(0.1ml/10g)，隨即計數(shù)其20min內(nèi)扭體

8、次數(shù)及首次扭體潛伏期時長。小鼠每次扭體以腹部內(nèi)凹、軀干與后腿伸張、臀部高起等為判別標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2.4.2熱輻射所致大鼠甩尾實驗
　　 實驗前將大鼠置固定筒內(nèi)，黑色標(biāo)記筆標(biāo)記大鼠距尾尖1/3處作為測試點。使大鼠尾巴自然下垂于筒外并固定于測定槽中且安靜時，用激光甩尾痛覺測試儀聚光燈產(chǎn)生恒定強(qiáng)度的光束照射在尾端標(biāo)記處(準(zhǔn)備強(qiáng)度為5％、測試強(qiáng)度為80％)，測定鼠尾急速擺動的時間（此時間作為大鼠痛閾值），另外，實驗前篩選動物基礎(chǔ)

9、痛閾在3-15秒間。實驗中，測定大鼠灌服給藥（模型對照組灌胃水）之后30min、60min、90min時痛閾值（每個時間點測定兩次，測定間隔5min）。
　　 3、實驗結(jié)果
　　 3.1安胃瘍膠囊對大鼠慢性淺表性胃炎的治療作用
　　 3.1.1對體重恢復(fù)及一般生理狀況的改善作用
　　 CSG大鼠灌胃安胃瘍15天后，高劑量組體重凈增長與模型對照組比較差異顯著;給藥30天后，安胃瘍膠囊高、中和低劑量組體重平均

10、凈增長幅度均大于CSG模型對照組。
　　 3.1.2對胃黏膜炎癥的抑制作用
　　 大鼠胃部解剖大體觀察可見，正常對照組大鼠胃黏膜光滑柔軟，呈橘紅色;CSG模型對照組大鼠黏膜充血水腫，有散在點狀、斑或條狀出血和糜爛，可見陳舊性出血點和新鮮出血點。經(jīng)Image-Pro Plus軟件分析，安胃瘍膠囊給藥30天后，中、低劑量組大鼠胃黏膜損傷面積減少、黏膜損傷率顯著降低;掃描電鏡結(jié)果顯示，CSG模型對照組大鼠胃小凹不規(guī)則、上皮細(xì)胞

11、表面潰爛，出現(xiàn)大小不一、形狀不規(guī)則的糜爛面并見紅細(xì)胞、炎性細(xì)胞滲出。安胃瘍膠囊給藥治療后，胃腺排列基本規(guī)則，上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本完整清晰、表面潰爛面積減小，損傷程度減輕。
　　 3.1.3對胃組織病理性損傷的抑制及修復(fù)
　　 胃組織病理學(xué)檢查（HE染色）結(jié)果表明，安胃瘍膠囊給藥30天后，大鼠胃黏膜固有層炎性細(xì)胞數(shù)減少，胃腺排列較整齊平整，腺管構(gòu)造較規(guī)則，黏膜固有層及黏膜肌層厚度恢復(fù)并接近正常對照組動物水平，安胃瘍膠囊中、低劑

12、量組與模型對照組比較差異顯著;大鼠胃組織病理等級分析統(tǒng)計結(jié)果表明，安胃瘍膠囊高、中、低三個劑量組對胃組織病理性損傷均有顯著的抑制及修復(fù)作用，與模型對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異;胃黏膜AB-PAS染色結(jié)果表明，安胃瘍膠囊高、低劑量組上皮細(xì)胞分泌粘蛋白指數(shù)顯著升高，中劑量組酸性粘蛋白指數(shù)顯著升高，與模型對照組比較差異顯著。
　　 3.1.4顯著改善CSG大鼠胃腸激素分泌功能
　　 與正常對照組比較，模型對照組胃液pH值、胃液分泌

13、量及胃蛋白酶活性均有顯著性差異。安胃瘍膠囊連續(xù)灌胃30天后，CSG大鼠胃分泌功能有一定程度的改善，安胃瘍膠囊三個劑量組胃液H+濃度降低;安胃瘍膠囊高、低劑量組胃液分泌量減少，胃蛋白酶活性顯著降低。同時血清胃動素水平升高，胃泌素水平下降。
　　 3.1.5改善CSG大鼠胃微循環(huán)血流量實驗結(jié)果表明，CSG模型組大鼠胃微循環(huán)血流量顯著下降，與正常對照組比較差異顯著。安胃瘍膠囊給藥30天后幽門部、幽門部血流量值增加，與模型對照組比較安胃

14、瘍膠囊三個劑量組胃微循環(huán)均有較大程度的改善，中劑量組作用顯著。
　　 3.2安胃瘍膠囊治療慢性淺表性胃炎的機(jī)制研究
　　 安胃瘍膠囊對慢性淺表性胃炎大鼠血清中IL-1β、IL-8水平有顯著降低作用，并顯著上調(diào)PGE2水平。同時，安胃瘍膠囊高劑量組外周血CD4+/CD8+比例顯著升高。
　　 3.3安胃瘍膠囊抗炎作用
　　 小鼠腹腔毛細(xì)管通透性實驗結(jié)果表明，與模型對照組比較，安胃瘍膠囊高、中和低劑量組腹腔洗

15、滌液OD值降低，中、低劑量組具有顯著性差異;大鼠角叉菜膠致炎后，在30min、60min時間點，安胃瘍膠囊高、中劑量組顯著抑制大鼠足趾腫脹程度，中劑量組抗炎作用時間延伸至90min。
　　 3.4安胃膠囊鎮(zhèn)痛作用
　　 在扭體實驗中，安胃瘍膠囊可延長小鼠首次扭體的潛伏期，同時降低20min內(nèi)扭體次數(shù)，與模型對照組比較，安胃瘍膠囊高、中和低劑量組小鼠的潛伏期均顯著延長，扭體次數(shù)均顯著降低;大鼠甩尾實驗結(jié)果表明，與模型對照組

16、比較，安胃瘍膠囊高劑量組在給藥后30 min有顯著性鎮(zhèn)痛作用，中、低劑量組在給藥后60 min有顯著性鎮(zhèn)痛作用。
　　 4、研究結(jié)論
　　 4.1安胃瘍膠囊對慢性淺表性胃炎(CSG)的藥效學(xué)作用主要表現(xiàn)在以下方面:
　　 4.1.1抑制CSG胃黏膜炎癥，減少炎癥對胃黏膜的損傷。
　　 4.1.2恢復(fù)胃黏膜屏障，對損傷的胃黏膜具有保護(hù)和修復(fù)作用。
　　 4.1.3改善胃腸激素的分泌，減少攻擊因子分泌

17、。
　　 4.2安胃瘍治療慢性淺表性胃炎相關(guān)藥理機(jī)制
　　 安胃瘍膠囊對慢性淺表胃炎的藥效學(xué)作用與抑制體內(nèi)的促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-8水平，提高PGE2水平，上調(diào)T淋巴細(xì)胞CD4+/CD8+比例，改善機(jī)體免疫功能等機(jī)制相關(guān)。
　　 4.3抗炎、鎮(zhèn)痛作用
　　 抗炎實驗結(jié)果表明，安胃瘍膠囊對小鼠腹腔炎癥及大鼠足趾炎癥具有顯著的抑制作用。小鼠鎮(zhèn)痛實驗證明，安胃瘍膠囊具有顯著的鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛作用起效時間與