枳堿性-中性轉(zhuǎn)化酶基因PtrA-NINV功能分析.pdf

1、Poncirus trifoliate(L.) Raf在柑橘培養(yǎng)中廣泛用作砧木，在充分冷馴化后可以抵御-20℃的低溫。在前期工作中，本實驗室利用抑制性消減雜交(SSH)的方法從枳中篩選出一種堿性/中性轉(zhuǎn)化酶PtrA/NINV,但該基因的功能并不清楚。
　　本研究從以下幾個方面進行了研究:1、從枳中分離出PtrA/NINV的全長ORF序列和啟動子區(qū)，鑒定并進行生物信息學(xué)分析。2、PtrA/NINV的亞細胞定位。3、PtrA/NINV

2、的抗性分析（冷，鹽，和干旱脅迫。
　　主要結(jié)果如下:
　　1.對PtrA/NINV進行序列分析，我們發(fā)現(xiàn)它編碼一個等電點為6.59的并且具有678個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)的分子量是76.4kDa。PtrA/NINV以及其他來自不同高等植物和藍藻的57個假定A/N-INV的蛋白研究表明PtrA/NINV被劃分為一組，其成員存在于線粒體，并有氧化脅迫耐性。有調(diào)查了的的其它基因的PtrA/NINV以及其他基因的蛋白質(zhì)序列的

3、MEME分析多序列比對表明所有測試序列共享九個包含GH100保守結(jié)構(gòu)的保守結(jié)構(gòu)域（序1-9）。多重序列比對表明PtrA/NINV和其他測試序列之間有58-81％的序列相似性。
　　2.從枳中分離出1709堿基對的PtrA/NINV啟動子區(qū)域。序列分析表明，存在有參與非生物脅迫以及光響應(yīng)幾個順式作用調(diào)節(jié)元件結(jié)合位點。這點被非生物脅迫下PtrA/NINV在枳中的誘導(dǎo)表達水平和正常條件下PtrA/NINV在枳中的晝夜節(jié)律性表達水平所證實

4、。
　　3.亞細胞定位的預(yù)測分析顯示PtrA/NINV蛋白可能定位于葉綠體和線粒體，我們將會進一步通過顯微鏡實驗測定。
　　4.PtrA/NINV過表達重新提及多種非生物脅迫的耐受性，包括冷，高鹽度，干旱，這是同時涉及優(yōu)良植物性能和相關(guān)的生理指標(biāo)，如相對于野生型(WT)植物較低水平的活性氧(ROS)，更少的氧化性損傷，相對降低的水損失率，以及更高的光合效率。轉(zhuǎn)基因植物在正常和應(yīng)激條件下均表現(xiàn)出較高的A/N-INV的活性和更高