枳CBF1類似基因(PtCBF1)啟動子功能分析.pdf

1、柑橘是我國南方的主要栽培果樹，受到低溫的嚴重影響。周期性的凍害導致柑橘果實產(chǎn)量急劇降低，樹體受害，造成巨大經(jīng)濟損失。培育抗寒性強的品種是解決凍害問題的關(guān)鍵之所在。由于柑橘的多胚性、性器官敗育以及童期長等原因，傳統(tǒng)的雜交育種等方法難以解決育種上存在的問題，而基因工程的發(fā)展，為柑橘育種提供了一個新的途徑。但在早期的基因工程中，組成性啟動子被廣泛地用來驅(qū)動外源基因的表達，難以獲得生長發(fā)育正常的轉(zhuǎn)基因品種。故在柑橘抗寒育種中，尋找有效的低溫應答

2、啟動子，更好地驅(qū)動相關(guān)基因的表達，為進一步了解柑橘抗寒機理奠定基礎。
　　 本研究在已克隆的枳（Poncirus trifoliata（L．）Raf）PtCBF1啟動子和啟動子缺失片斷分析的基礎上，深入研究該啟動子的活性，判斷該啟動子是不是冷誘導型啟動子，試圖找出最有活性的冷敏感啟動子，并對啟動子的功能區(qū)域進行研究。旨在進一步揭示柑橘類植物抗低溫的機制。其主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1．根據(jù)已克隆的PtCBF1啟動子及啟

3、動子上具有的可能應答環(huán)境脅迫的元件，特別是上游順式作用元件MYC識別位點在冷應答途徑中的作用，將啟動子缺失片斷與報告基因GUS連接，根癌農(nóng)桿菌介導的煙草轉(zhuǎn)化，來研究啟動子的功能特性。
　　 2．GUS組織化學染色和熒光定量試驗表明：全長片段和571 bp啟動子活性最強。PtCBF1啟動子可能是一種冷誘導型啟動子：推斷MYC元件可能調(diào)節(jié)PtCBF1啟動子感應低溫信號，還可能受其它轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控。
　　 3．RT-PCR表明，