棉花GhMYB5基因的克隆及其啟動(dòng)子功能分析.pdf

1、MYB基因是植物最重要的轉(zhuǎn)錄因子家族之一，廣泛參與植物對(duì)非生物脅迫的應(yīng)答、植物形態(tài)建成、次生代謝調(diào)節(jié)等過(guò)程。本文根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室測(cè)序分析的陸地棉MaxxaBAC文庫(kù)，利用RT-PCR技術(shù)由海島棉中克隆出一個(gè)新的MYB轉(zhuǎn)錄因子基因GbMYB5（Genbank 登錄號(hào)為：JF820389），以期為MYB基因子在植物抗非生物脅迫方面的研究提供理論基礎(chǔ)。研究進(jìn)展如下：
　　 1、RT-PCR檢測(cè)了GbMYB5在棉花不同器官組織中的表達(dá)情況。

2、結(jié)果表明，GbMYB5基因在植物的莖、葉、蕾、絮和種子中均有表達(dá)，尤以在葉子中的表達(dá)水平最高。
　　 2、RT-PCR對(duì)GbMYB5基因在不同脅迫處理下的表達(dá)情況進(jìn)行分析。脅迫實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，重金屬脅迫可短暫抑制GbMYB5基因表達(dá)，但表達(dá)量在處理48h后回升至正常水平。PEG、ABA和GA 誘導(dǎo)均可增強(qiáng)GbMYB5基因的表達(dá)。
　　 3、構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA2301-GbMYB5，其中含有CaMV35s啟動(dòng)子

3、，具有卡那霉素抗性篩選標(biāo)記。經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)及雙酶切鑒定，構(gòu)建的載體符合預(yù)期設(shè)計(jì)。
　　 4、通過(guò)熱激法將pCAMBIA2301-GbMYB5質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404，PCR檢測(cè)結(jié)果表明含有目的基因的質(zhì)粒載體成功導(dǎo)入到了農(nóng)桿菌中。用含pCAMBIA2301-Gb的根癌農(nóng)桿菌侵染煙草，在篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)，PCR鑒定14株為陽(yáng)性。
　　 5、將抗性苗移栽至溫室培養(yǎng)，提取煙草總RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果表明目的基