播娘蒿抗寒基因COR的克隆及其生物信息學(xué)分析與表達(dá)研究.pdf

1、本文采用十字花科極度耐寒的播娘蒿(Descurainia sophia)作為植物抗寒基因研究的材料?？寺〔ツ镙锏目购駽OR，為改造植物耐寒性提供新的材料。該基因的獲得對(duì)從基因水平上揭示其抗寒機(jī)制，提高植物的耐寒性具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)研究的主要內(nèi)容包括： 1.播娘蒿COR基因(DsCOR)的克隆。根據(jù)擬南芥cor15a基因及油菜的BN115等同源基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)同源克隆簡(jiǎn)并引物。以播娘蒿總cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，

2、獲得了與擬南芥cor15a基因擴(kuò)增片段大小相似、序列同源性84.7％的336bp的EST片段，再利用3’RACE和5’RACE技術(shù)得到DsCOR的ORF讀框和完整的3’端非翻譯區(qū)序列。 2.生物信息學(xué)分析DsCOR與擬南芥cor15a、油菜BN115的序列同源性分別為85.7％和75.4％。 3.該蛋白分子量為14.4KD，等電點(diǎn)6.83，為一個(gè)酸性蛋白。在pH7.0的環(huán)境中它帶有-0.13電荷，摩爾消光系數(shù)為3840。

3、 4.與十字花科擬南芥中的抗寒基因相比播娘蒿DsCOR具有以下特點(diǎn)：DsCOR具有5個(gè)主要的跨膜區(qū)域，分別位于20-40，99-121，181-199，253-270，345-369區(qū)域。另外，播娘蒿DsCOR擊中2個(gè)主要的信號(hào)傳導(dǎo)位點(diǎn)cAMP-andcGMP-依賴的蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)和蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)，它們對(duì)于冷馴化過程中Ca2+信號(hào)的傳導(dǎo)是十分重要的。 5.構(gòu)建原核表達(dá)載體pET32-DsCOR，并成功在大腸桿菌