HBV前C區(qū)和C啟動(dòng)子區(qū)變異與宮內(nèi)感染及產(chǎn)前阻斷關(guān)系的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(船V)感染仍是我國(guó)乃至全球范圍內(nèi)主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。在亞洲母嬰傳播是HBV最主要的傳播途徑，宮內(nèi)感染是免疫接種失敗的主要原因。國(guó)內(nèi)多項(xiàng)研究表明無(wú)癥狀HBV攜帶孕婦孕28周起每四周肌注注射乙肝免疫球蛋白(HBIG)200一4001u，直至臨產(chǎn)，能顯著降低HBV的宮內(nèi)感染率。既往研究發(fā)現(xiàn)HBVS區(qū)野生株和變異株均可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，并可能是免疫接種失敗的重要原因。HBV前C(precorePC)區(qū)是宿主免疫攻擊的靶表位，C

2、啟動(dòng)子區(qū)(core．promoterCP)特別是基本C啟動(dòng)子區(qū)(basiccorepromoterBCP)在病毒復(fù)制中起著重要的作用，前C區(qū)及CP區(qū)變異和宮內(nèi)感染的關(guān)系尚無(wú)母親和新生兒配對(duì)的研究報(bào)道。國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道長(zhǎng)期大劑量應(yīng)用HBIG可引起HBVS區(qū)基因變異使病毒發(fā)生逃逸突變；我們課題組最近研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)前阻斷常規(guī)劑量的使用HBIG并沒(méi)增加HBVS區(qū)基因的變異。作為免疫制劑，HBIG對(duì)HBV前C區(qū)和BCP區(qū)有何影響還未有人進(jìn)行過(guò)研究。本課題

3、對(duì)HBV前C區(qū)和CP區(qū)變異與宮內(nèi)感染的關(guān)系進(jìn)行了探討，并對(duì)產(chǎn)前阻斷(產(chǎn)前注射HBIG)與HBV前C區(qū)、CP區(qū)變異的關(guān)系進(jìn)行了研究。 第一部分HB~前C區(qū)和C啟動(dòng)區(qū)變異與宮內(nèi)感染的關(guān)系 目的：探討孕婦HBV前C區(qū)、基本C啟動(dòng)子區(qū)(BCP)變異與宮內(nèi)感染的關(guān)系。 方法：無(wú)癥狀慢性HBV攜帶臨產(chǎn)孕婦及其新生兒99對(duì)(產(chǎn)前阻斷組58對(duì)，非產(chǎn)前阻斷組41對(duì))采用熒光定量PCR法檢測(cè)血清HBVDNA載量、EIA法檢測(cè)HBsA

4、g、HBeAg，22例產(chǎn)前阻斷組新生兒EIA法檢測(cè)血清抗一HBs；99對(duì)母子采用巢式PCR法擴(kuò)增HBV前C區(qū)和BCP區(qū)核苷酸片斷，ABl3730型DNA自動(dòng)熒光測(cè)序儀對(duì)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序。 結(jié)果：(1)58例產(chǎn)前阻斷組新生兒的宮內(nèi)感染率(22．4％)明顯低于4l例非產(chǎn)前阻斷組新生兒的宮內(nèi)感染率(43．9％)(x。=5．15，p=0．023)；22例產(chǎn)前阻斷組新生兒9例(40．9％9／22)抗HBs陽(yáng)性。(2)82例孕婦HBV前C

5、區(qū)和BCP區(qū)核苷酸片斷擴(kuò)增測(cè)序成功，最常見(jiàn)的變異是18966一A、1762A—T、1764G—A、1752A—G、1799C—G變異。1896G—A變異孕婦的宮內(nèi)感染率(25．0％)與未檢出1896G—A變異孕婦的宮內(nèi)感染率(37．0％)差異無(wú)顯著性(x2=O．236，p=0．627)；1762A—T／17646一A連鎖變異孕婦的宮內(nèi)感染率(22．2％)與未檢出該連鎖變異孕婦的宮內(nèi)感染率(37．2％)差異無(wú)顯著性(Fisher's精確檢

6、驗(yàn)p=0．470)；1752A—G／1799C—G連鎖變異孕婦的宮內(nèi)感染率(26．3％)與未檢出該連鎖變異孕婦的宮內(nèi)感染率(36．5％)差異無(wú)顯著性(x2=0．297，p=0．586)；1799C—G單獨(dú)變異宮內(nèi)感染率(45．6％)與未檢出該點(diǎn)單獨(dú)變異孕婦的宮內(nèi)感染率(32．4％)無(wú)顯著性差異(x2=0．258，p=0．611)；各常見(jiàn)變異孕婦組問(wèn)宮內(nèi)感染率也無(wú)顯著性差異(Fisher's精確檢驗(yàn)p均>0．05)。(3)60對(duì)母子均擴(kuò)增

7、測(cè)序成功，母子前C區(qū)和BCP區(qū)核苷酸序列存在很大差異，45對(duì)母子前C區(qū)和BCP區(qū)核苷酸序列不一致。 結(jié)論：(1)產(chǎn)前阻斷能顯著降低HBV的宮內(nèi)感染率，HBIG中的抗一HBs經(jīng)胎盤(pán)攝取，使胎兒提早獲得被動(dòng)免疫可能是其機(jī)制；(2)HBV前C區(qū)和BCP區(qū)常見(jiàn)變異對(duì)宮內(nèi)感染率無(wú)明顯影響；(3)HBV前C區(qū)和BCP區(qū)變異株和野生株均可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，變異株和野生株的傳播按其生物學(xué)特性對(duì)個(gè)體有所選擇。 第二部分產(chǎn)前注射libIG對(duì)

8、}lBV前C區(qū)和C啟動(dòng)子區(qū)的影響 目的：探討產(chǎn)前阻斷(產(chǎn)前注射HBIG)對(duì)乙肝病毒前C區(qū)和BCP區(qū)核苷酸序列的影響。 方法：無(wú)癥狀慢性HBV攜帶孕婦120例(HBIG組67例，非HBIG組53例)采用熒光定量PCR法檢測(cè)血清HBVDNA載量、EIA法檢測(cè)血清HBsAg、HBeAg，巢式PCR法擴(kuò)增HBVDNA前C區(qū)和BCP區(qū)核苷酸片斷，ABl3730型DNA自動(dòng)熒光測(cè)序儀對(duì)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序。 結(jié)果：(1)HBI

9、G組33例孕婦收集到阻斷前后雙份血清，阻斷前后血清HBVDNA載量無(wú)顯著性差異(t=0．375，P=0．709)；23例孕婦阻斷前后HBVDNA前C區(qū)、BCP區(qū)均擴(kuò)增測(cè)序成功，阻斷前／后HBV前C區(qū)+BCP、前C區(qū)、BCP區(qū)核苷酸的替代變異率分別為0．15％／0．14％、O．70％／0．55％、1．69％／1．65％，阻斷前后均無(wú)顯著性差異(Fisher’s精確檢驗(yàn)p均>0．05)；阻斷前后18966一A、18996一A、1762A—T

10、、1764G—A等熱點(diǎn)總變異發(fā)生率分別為27．2％、13．0％，阻斷后熱點(diǎn)總變異發(fā)生率明顯低于阻斷前(x2=5．717，p=0．017)，1896G—A、1899G—A、1762A—T、1764G—A各熱點(diǎn)變異的發(fā)生率阻斷前／后分別為30．4％／17．4％、17．4％／4．3％、26．1％／13．0％、34．8％／17．4％，阻斷后各熱點(diǎn)變異的發(fā)生率均低于阻斷前，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異(p>O．05)；13例阻斷前或阻斷后檢測(cè)到熱點(diǎn)變

11、異的孕婦阻斷后熱點(diǎn)總變異發(fā)生率(23．1％)明顯低于阻斷前(48．1％)(x2=7.00，p=O．008)；(2)53例HBIG組孕婦／47例非HBIG組孕婦臨產(chǎn)時(shí)HBVDNA前C區(qū)+BCP、前C區(qū)、BCP區(qū)核苷酸的替代變異率分別為0．9％／O．8％、0．3％／0．3％、L1％／0．9％，兩組無(wú)顯著性差異(Hsher’s精確檢驗(yàn)p>O．05)；HBIG組／非HBIG組孕婦1896G—A、1899G—A、1762A—T、1764G—A熱點(diǎn)

12、總變異發(fā)生率及各熱點(diǎn)變異發(fā)生率分別為5．7％／10．1％、9．4％／14．9％、0／2．1％、7．5％／10．6％、5．7％／12．8％，HBIG組熱點(diǎn)總變異發(fā)生率及各熱點(diǎn)變異的發(fā)生率均低于非HBIG組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異(p>0．05)。 結(jié)論：(1)產(chǎn)前阻斷(注射HBIG)不能降低孕婦體內(nèi)的HBVDNA水平；(2)產(chǎn)前阻斷并不增加孕婦HBVDNA前C區(qū)、基本核心啟動(dòng)子區(qū)核苷酸變異；(3)產(chǎn)前阻斷可能使孕婦體內(nèi)HBV前C