扶綏肝癌高發(fā)區(qū)HBV前S區(qū)、C區(qū)基因突變與肝癌的關(guān)系及參照序列的建立.pdf

1、目的：探究扶綏縣肝癌高發(fā)區(qū)乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)前S(PreS)、前C/BCP(PreC/BCP)區(qū)基因突變與肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,并建立扶綏縣 HBV流行株 PreS,S，PreC/BCP基因參照序列。
　　方法：
　　1．從扶綏肝癌高發(fā)區(qū)肝癌高危人群隊(duì)列中，選取30例HBV相關(guān)肝癌患者發(fā)病前連續(xù)2-5年以及肝癌確診年份的血清

2、作為病例組，并以35例相同連續(xù)年份未發(fā)生肝癌成員同期的血清標(biāo)本作為對(duì)照組，經(jīng)抽提DNA，巢式PCR等實(shí)驗(yàn)方法，擴(kuò)增得到HBV前S（PreS）區(qū)、S區(qū)、前C/BCP（PreC/BCP）區(qū)產(chǎn)物，經(jīng)純化測(cè)序，采用病例對(duì)照研究、縱向研究、巢式病例對(duì)照研究等方法，觀察前S區(qū)缺失，前S2起始密碼子突變、C3026T、T53C、T1858C、A1775G、G1896A和A1762T/G1764A突變與肝癌發(fā)生的關(guān)系。
　　2．選取2013年扶綏

3、縣HBV無(wú)癥狀攜帶者(Asymptomatic carrier，AsC)89例，測(cè)定其PreS、S、PreC/BCP基因，采用同源性分析等方法確定基因型，并按基因型在MEGA軟件中進(jìn)行序列比對(duì)，建立參照序列。
　　結(jié)果：
　　1．A1775G、T1858C、PreS區(qū)缺失在病例組中的發(fā)生率顯著高于對(duì)照組(P<0.05),比值比(odds ratio，OR)分別為0.215、3.636、4.306。而A1762T/G1764A

4、、G1896A、C3026T、PreS2起始密碼子，T53C突變?cè)趦山M的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2．縱向研究顯示，PreC/BCP區(qū)27例、PreS區(qū)28例肝癌病例中，從進(jìn)入隊(duì)列觀察開始年份至發(fā)生肝癌期間，大部分肝癌患者A1762T/G1764A、T1858C、PreS區(qū)缺失，PreS2起始密碼子突變，C3026T、G1896A于肝癌發(fā)生前4-5已出現(xiàn)并趨于穩(wěn)定，T53C在肝癌診斷前2-3年開始出現(xiàn)，5例觀察到了基

5、因突變的動(dòng)態(tài)變化。
　　3．巢式病例對(duì)照研究顯示，病例組T1858C，PreS區(qū)缺失，1775無(wú)突變的發(fā)生率顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，OR值分別為2.877，4.267，3.706。
　　4．建立的扶綏縣參照序列與Gen Bank收錄的中國(guó)其他地區(qū)同基因型HBV序列（CDQ448627、EU439006）相比差異較大，最高可達(dá)2.07％。與中國(guó)地區(qū)HBV參照序列（CHN-HBV07-B和CHN-HBV07-C）相比差異

6、較??；扶綏縣不同基因型間參照序列的差異程度大于不同地區(qū)同基因型序列間的差異,最小2.87%，最大可達(dá)9.65%。
　　結(jié)論：
　　1. T1858C,PreS區(qū)缺失能夠增加肝癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，是肝癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素，A1775G能夠降低肝癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，是肝癌的保護(hù)性因素。
　　2.A1762T/G1764A、T1858C、PreS區(qū)缺失，PreS2起始密碼子突變、C3026T、G1896A作用于肝癌發(fā)展的早期階段，A1775