乙型肝炎病毒基因型及基因亞型和基本核心啟動子區(qū)-前C區(qū)基因突變與廣西肝癌家族聚集的相關(guān)性研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 乙型肝炎病毒基因型及基因亞型與廣西肝癌高發(fā)區(qū)肝癌家族聚集的相關(guān)性研究
　　目的:探討廣西肝癌高發(fā)區(qū)乙型肝炎病毒(HBV)基因型和基因亞型的分布特征及與廣西肝癌家族聚集的相關(guān)性。
　　方法:按相同的性別、年齡(±5)歲、相同的生活環(huán)境配對，收集2007年7月～2012年7月廣西肝癌高發(fā)區(qū)39個肝癌高發(fā)家族（實驗組）和59個無癌家族（對照組）中的成員各103例，入選者均為HB

2、V感染者并且HBV DNA≥100IU/ml者。應(yīng)用型特異性引物巢式PCR以及測序的方法進(jìn)行基因型的檢測，應(yīng)用巢式PCR以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)進(jìn)行基因亞型的檢測分析。
　　結(jié)果:(1)肝癌高發(fā)家族成員的HBV DNA基線水平顯著高于無癌家族成員(P=0.008)，HBV DNA≥105copies/ml病毒高載量的成員在肝癌高發(fā)家族和無癌家族中分別為35.9％和17.5％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

3、(P=0.003)。
　　(2)研究對象共檢出HBV基因型有B、C、B/C混合、D四種，分別占30.6％、59.2％、4.4％、2.4％，以B、C基因型為主，其中C型為優(yōu)勢基因型。肝癌高發(fā)家族和無癌家族成員在B、C、B/C混合、D四種基因型中所占比例分別為31.1％、63.1％、1.9％、1.9％和30.1％、55.3％、6.8％、2.9％，均無顯著差異(P＞0.05)。HBeAg陽性率C高于B基因型(P=0.000)，B、C基因

4、型在性別、年齡、民族、HBVDNA水平上均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。在肝癌高發(fā)家族中，各級親屬間B、C基因型的分布比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。在肝癌高發(fā)家族成員中，男性及≥30歲的C基因型比例明顯高于無癌家族成員(P＜0.01)，女性、＜30歲、民族、HBeAg陽性及HBeAg陰性的C基因型比例在兩組中沒有顯著差異(P＞0.05);B基因型無論從性別、年齡分層、民族還是HBeAg狀態(tài)上比較兩組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。

5、
　　(3)研究對象檢出各基因亞型比例為B2(30.6％)，C1(38.8％)，C2(20.4％)，B2C1(2.9％)，B2C2(1.5％)，未發(fā)現(xiàn)其他亞型，B2和C1亞型占絕大多數(shù)。肝癌高發(fā)家族和無癌家族成員在B2、C1、C2、B2C1、B2C2亞型中所占比例分別為31.1％、41.7％、21.4％、1.0％、1.0％和30.1％、35.9％、19.4％、4.9％、1.9％，兩組無顯著差異(P＞0.05)。HBeAg陽性率C1

6、高于B2亞型(P=0.000)。B2、C1、C2亞型在性別、年齡、民族、HBVDNA水平上無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。在肝癌高發(fā)家族中，B2、C1、C2亞型在各級親屬間的比例無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。肝癌高發(fā)家族成員中，男性及≥30歲的C1亞型比例明顯高于無癌家族成員（P＜0.05），女性、＜30歲、民族、HBeAg陽性及HBeAg陰性的C1亞型比例在兩組中沒有統(tǒng)計差異(P＞0.05)。B2及C2亞型比例無論從性別、年齡分層、民族

7、還是HBeAg狀態(tài)上比較兩組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:HBV的復(fù)制水平與廣西肝癌高發(fā)區(qū)肝癌家族聚集密切相關(guān)。廣西肝癌高發(fā)區(qū)HBV基因型以B、C基因型為主，C型占絕大多數(shù)，有少量的B/C混合型和D基因型。B基因型其亞型全部為B2亞型，C基因型有C1和C2亞型，以C1亞型為主，B2和C1亞型占絕大多數(shù)。各基因型和亞型的分布在肝癌高發(fā)家族和無癌家族中沒有明顯差異。但男性及≥30歲的C基因型和C1亞型成員可能可以增加患肝

8、癌的風(fēng)險。
　　第二部分 廣西肝癌高發(fā)區(qū)乙型肝炎病毒基本核心啟動子區(qū)/前C區(qū)基因突變對廣西肝癌家族聚集的影響
　　目的:探討廣西肝癌高發(fā)區(qū)乙型肝炎病毒(HBV)基因組基本核心啟動子(BCP)區(qū)和前C區(qū)基因突變對肝癌家族聚集的影響。
　　方法:收集2007年7月～2012年7月廣西肝癌高發(fā)區(qū)39個肝癌高發(fā)家族中103例作為試驗組，為了盡可能避免混雜因素對研究對象的影響，在相同地區(qū)59個無癌家族中選擇與試驗組年齡、性別、生

9、活環(huán)境相匹配的103例作為對照組。將研究對象按民族分布分為壯族組（96例）、瑤族組（52例）和漢族組（58例）。按HBeAg陽性及陰性分為陰性組（140例）和陽性組（66例）。按是否突變分為突變組和未突變組。按親屬分級將肝癌高發(fā)家族成員分為一級親屬組(48例)，二級親屬組（32例），三級及以上親屬組（23例）。所有研究對象均為HBV感染者，并且HBV DNA≥100IU/ml，采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增HBV DNA BCP區(qū)/前C

10、區(qū)的基因片段并測序分析，檢測HBV DNA BCP區(qū)和前C區(qū)的基因突變情況，并分析BCP區(qū)和前C區(qū)的基因突變與HBV基因型的關(guān)系。
　　結(jié)果:(1)肝癌高發(fā)家族成員HBV DNA基線水平和HBV DNA≥105copies/ml病毒高載量的例數(shù)均高于無癌家族成員(P＜0.01)。
　　(2)HBV DNA BCP區(qū)/前C區(qū)基因突變發(fā)生頻率在前十位的位點為A1762T、G1764A、T1858C、A1775G、C1856T、G

11、1896A、 T1753C、A1846T、T1803G、G1898A，它們在肝癌高發(fā)家族和無癌家族組成員中的檢出數(shù)分別為74.8％、70.9％、52.4％、46.6％、41.7％、34.0％、22.3％、18.4％、14.6％、6.8％和53.4％、46.6％、42.7％、35.0％、22.3％、15.5％、9.7％、9.7％、7.8％、3.9％。它們有多種突變組合形式，以聯(lián)合突變?yōu)橹鳎珹1762T/G1764A雙突變在聯(lián)合突變中最常見

12、。在十個突變位點中，其中BCP區(qū)的A1762T、G1764A、T1753C三個位點和前C區(qū)的C1856T、G1896A兩個位點的突變率在肝癌高發(fā)家族成員中均顯著高于無癌家族成員（P＜0.05），此外，肝癌高發(fā)家族成員組和無癌家族成員組中聯(lián)合突變及A1762T/G1764A雙突變的檢出率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。將單因素有統(tǒng)計學(xué)差異的HBV DNA≥105copies/ml、聯(lián)合突變、A1762T/G1764A雙突變、A1762

13、T、G1764A、T1753C、C1856T和G1896A等指標(biāo)進(jìn)行Logistic多因素分析顯示:HBVDNA≥105copies/ml(P=0.000，OR=18.637，95％CI:6.014-57.757)、A1762T/G1764A雙突變(P=0.009,OR=3.388,95％CI:1.360-8.441)、C1856T(P=0.000, OR=10.270,95％CI:3.638-28.996)和G1896A(P=0.00

14、0,OR=7.597,95％CI:2.720-21.213)是肝癌高發(fā)的獨立危險因素。
　　(3)A1762T、G1764A、C1856T、T1753C、G1896A的突變率在壯族、瑤族、漢族組中沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。A1762T、G1764A、C1856T和G1896A位點HBeAg陰性組的突變率顯著高于HBeAg陽性組（P＜0.01），而T1753C在兩組中的突變率無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。突變組A1762T、G

15、1764A和G1896A的HBVDNA復(fù)制水平比未突變組低(P＜0.01)，而T1753C和C1856T在兩組中的HBVDNA復(fù)制水平無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。在肝癌高發(fā)家族中，一級親屬組A1762T及G1764A的突變率高于二級親屬組(P＜0.05)，各級親屬在C1856T、T1753C、G1896A的突變率無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:(1)廣西肝癌高發(fā)區(qū)HBV DNA水平和HBV DNA BCP區(qū)/前C區(qū)中的

16、A1762T、G1764 A、T1753C、C1856T和G1896A基因位點的突變均與廣西肝癌高發(fā)區(qū)肝癌家族聚集密切相關(guān)。聯(lián)合突變是主要的突變形式，聯(lián)合突變可能發(fā)揮協(xié)同的作用，T1762/A1764雙突變可能對肝癌的高發(fā)具有重要的預(yù)測價值。
　　(2)HBV DNA BCP區(qū)/前C區(qū)的突變可能使HBeAg減少或消失，而且突變組HBV DNA的水平低于未突變組的HBVDNA的水平，廣西肝癌高發(fā)區(qū)肝癌家族聚集的發(fā)生可能不是通過突變提