hURAT1基因啟動子區(qū)-87C-T SNP與原發(fā)性痛風的關(guān)聯(lián)及功能研究.pdf

1、目的：人尿酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白1(hURAT1)是維持血尿酸水平的關(guān)鍵離子通道，是導致原發(fā)性高尿酸血癥的重要侯選基因。根據(jù)前期工作基礎，我們發(fā)現(xiàn)hURAT1基因啟動子區(qū)-87C/T SNP與原發(fā)性高尿酸血癥相關(guān)，且該SNP可導致基因轉(zhuǎn)錄活性改變。由于高尿酸血癥與痛風遺傳因素并不完全相同，本研究擬進一步在山東漢族男性痛風人群中進一步篩查該點，明確該SNP是否與原發(fā)性痛風相關(guān)；同時擬進一步開展機制研究，探討該SNP轉(zhuǎn)錄活性差異是否由不同轉(zhuǎn)錄因子介導

2、。
　　 方法：收集山東漢族男性痛風病人335例，正常男性對照376例，提取全血基因組DNA，進行PCR擴增，進而測序分析，χ2檢驗比較不同組別基因型及等位基因頻率，明確該SNP位點與痛風的相關(guān)性。應用Transfac6.0及Alibaba2.1軟件就該位點不同等位基因型轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合情況進行預測；抽提OK細胞核蛋白，標記包含-87C/T SNP不同等位基因型的探針，設立空白對照，運用EMSA實驗觀察兩種等位基因型探針蛋白結(jié)合情況

3、。根據(jù)生物信息預測結(jié)果，設計CREB，USF，GR共有序列及包含-87C/T SNP不同等位基因型的非標記探針，運用冷競爭實驗來初步明確-87C/T SNP不同等位基因型引發(fā)轉(zhuǎn)錄活性差異涉及的轉(zhuǎn)錄因子。
　　 結(jié)果：1.hURAT1基因啟動子區(qū)-87C/T SNP與山東漢族男性痛風發(fā)病相關(guān)(P=0.004)。等位基因頻率結(jié)果顯示：C基因型發(fā)病風險為T基因型的1.43倍；基因型頻率結(jié)果顯示：CC基因型發(fā)病風險為TT基因型的2倍。2

4、.生物學信息預測結(jié)果：Transfac6.0提示：-87C等位基因型較T等位基因型可能多USF結(jié)合位點，少GR結(jié)合位點，或是兩者結(jié)合活性存在差異；Alibaba2.1提示：-87C等位基因型較T等位基因型可能多CREB結(jié)合位點或結(jié)合活性存在差異。3.EMSA結(jié)果顯示-87C/T兩種等位基因型均與核蛋白結(jié)合形成兩條特異性條帶，但其中一條條帶T等位基因型較C等位基因型增強；冷競爭實驗結(jié)果顯示GR及CREB可競爭掉特異性條帶，但USF不參與上