JAK-STAT信號(hào)通路阻斷劑AG490聯(lián)合DDP對(duì)子宮頸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn)觀察JAK/STAT通路阻斷劑AG490聯(lián)合化療藥物DDP對(duì)子宮頸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響，探討AG490通過(guò)阻斷STAT3通路對(duì)人子宮頸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制作用及與Caspase-3蛋白表達(dá)的關(guān)系。以期對(duì)臨床上藥物治療與預(yù)防子宮頸癌尋找更加完善的途徑。 方法：建立人子宮頸癌(Hela)細(xì)胞裸鼠異種移植瘤模型并分組。AG490單用或聯(lián)合DDP處理各組裸鼠。用藥期間測(cè)量裸鼠體重和腫瘤體積，檢測(cè)瘤重計(jì)算抑瘤率。流式細(xì)

2、胞分析術(shù)測(cè)腫瘤組織中細(xì)胞凋亡情況，免疫組化檢測(cè)移植瘤組織中P-stat3和Caspase-3蛋白表達(dá)。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。 結(jié)果： 1、藥物對(duì)裸鼠移植瘤體積生長(zhǎng)的影響：分別在用藥后第1天、第4天、第7天及第10天測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑(a)、短徑(b)，計(jì)算體積，描繪移植瘤生長(zhǎng)曲線圖。結(jié)果可見(jiàn)從用藥第7天開(kāi)始DDP組、AG490組以及聯(lián)合用藥組(DDP+AG490組)腫瘤體積均小于對(duì)照組，有顯著性差異(

3、P<0.001)。聯(lián)合用藥組與DDP組、AG490組比抑瘤作用顯著增強(qiáng)(P<0.05、P<0.001)。DDP組對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)抑制與AG490組相比顯著增強(qiáng)(P<0.05)。 2、藥物對(duì)移植瘤裸鼠體重及副作用的影響：藥物治療子宮頸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)期間，從用藥第7天開(kāi)始，順鉑組和聯(lián)合用藥組與對(duì)照組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。AG490組與對(duì)照組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)且裸鼠一般情況良好，進(jìn)食和體重?zé)o明顯變化。DD

4、P組于治療開(kāi)始后第7天裸鼠逐漸出現(xiàn)嚴(yán)重消瘦，營(yíng)養(yǎng)不良，并且出現(xiàn)明顯食欲減退，活動(dòng)遲緩，皮膚無(wú)光澤等毒副反應(yīng)，體重變化與聯(lián)合用藥組間存在明顯差異(P<0.05)，該組有1只裸鼠死亡。 3、各組裸鼠移植瘤瘤重的變化：處死裸鼠，剝出瘤塊用電子天平稱量瘤重(W)，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率分別為對(duì)照組0％、順鉑組51.2％、AG490組33.6％、聯(lián)合用藥組59.2％與對(duì)照組相比，各藥物作用組均對(duì)裸鼠移植瘤有抑制作用，差異有顯著性意義(P<0.

5、05)。AG490與DDP聯(lián)合應(yīng)用比兩者單獨(dú)應(yīng)用抑瘤作用更明顯，差異有顯著性意義(P<0.05)。DDP組比AG490組抑瘤作用強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 4、流式細(xì)胞儀分析凋亡率：DDP組、AG490組和聯(lián)合用藥組有明顯G1期形成的凋亡峰，三個(gè)用藥組的凋亡率分別是52.1±1.3％、39.5±0.4％、66.7±1.8％。與對(duì)照組10.2±2.4％相比均有顯著性差異(P<0.05)。流式細(xì)胞分析的各組DNA組方圖，

6、可見(jiàn)各用藥組有明顯的G1期形成的凋亡峰。 5、光學(xué)顯微鏡下觀察Hela細(xì)胞裸鼠移植瘤組織形態(tài)學(xué)的改變：肉眼觀移植瘤呈結(jié)節(jié)狀，腫瘤組織血供豐富，無(wú)明顯周圍組織和皮膚浸潤(rùn)，界限清楚，易分離，切面呈魚(yú)肉樣。光鏡下觀察腫瘤細(xì)胞呈巢、片、條索狀排列，瘤細(xì)胞體大、核大深染，核仁明顯，病理性核分裂相易見(jiàn)，瘤周組織內(nèi)血管擴(kuò)張充血，并有少量淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，瘤巢之間有少量的纖維及血管。瘤組織內(nèi)見(jiàn)小灶性凝固性壞死。用藥后，腫瘤組織出現(xiàn)不同程

7、度的壞死。腫瘤細(xì)胞平均壞死率為：對(duì)照組21.8±9.0％、A6490組39.4±11.3％、DDP組40.8±7.3％、聯(lián)合用藥組61.9±9.6％，各組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著意義(P<0.05)，聯(lián)合用藥組與AG490組、DDP組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 6、免疫組化結(jié)果：P-stat3的陽(yáng)性表達(dá)主要位于宮頸癌細(xì)胞的胞漿內(nèi)，染色較深，散在分布，Caspase-3的陽(yáng)性表達(dá)亦位于胞漿內(nèi)，散在或灶性分布。各組陽(yáng)性率依次

8、為：P-STAT3對(duì)照組92.5％；DDP組64％；AG490組55％；聯(lián)合用藥組40.9％；Caspase-3對(duì)照組30.4％；DDP組60％；AC490組55.6％；聯(lián)合用藥組92.3％；在AG490組中，P-stat3蛋白與Caspase-3蛋白的表達(dá)無(wú)負(fù)相關(guān)性(r=-0.074，P>0.05) 結(jié)論： 1、AG490能抑制人宮頸癌Hela細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，還可以增加順鉑對(duì)宮頸癌的藥物敏感性，降低順鉑化療的毒副