人表皮干細(xì)胞對裸鼠皮膚缺損再上皮化的實驗研究.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)人表皮干細(xì)胞(epidermal stem cells ESCs)并研究觀察其對裸鼠(BALB/c mice)全層皮膚缺損再上皮化的作用。 方法：1、人ESCs的分離培養(yǎng)和生物學(xué)特性的檢測：用“Ⅳ型膠原粘附法”分離培養(yǎng)人ESCs后，應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)，用細(xì)胞免疫化學(xué)染色、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。2、人表皮干細(xì)胞對裸鼠全層皮膚缺損再上皮化的實驗研究：將培養(yǎng)獲得的人ESCs用DAPI標(biāo)記后，制備成細(xì)胞懸液

2、注射于12只裸鼠背部的全層皮膚缺損創(chuàng)面，通過對創(chuàng)面愈合過程的大體病理HE染色觀察、4’，6-二脒基-2-苯基吲哚(4’，6-diamidino-2-phenylindole DAPI)熒光染色和免疫組織化學(xué)染色檢測裸鼠創(chuàng)面組織內(nèi)人ESCs，研究ESCs對創(chuàng)面再上皮化的作用。 結(jié)果：1、用“Ⅳ型膠原粘附法”獲得的細(xì)胞貼壁生長，分離孵育培養(yǎng)過夜后，細(xì)胞逐漸伸展形成鋪路石樣，細(xì)胞核較大，核漿比例大，大多相互聚集克隆生長形成細(xì)胞集落；細(xì)

3、胞化學(xué)染色顯示CK14、CK19、β1整合素呈陽性表達(dá)，CK10呈陰性表達(dá)；細(xì)胞周期分析ESCs處于G1期與S期的細(xì)胞比例之和為83.04％。其生物學(xué)特性符合表皮干細(xì)胞的特征。2、人ESCs對裸鼠全層皮膚缺損再上皮化作用的實驗結(jié)果顯示：ESCs組12只裸鼠傷后3d的創(chuàng)面愈合率為48.72±12.88％，與空白對照組12只裸鼠傷后3d創(chuàng)面愈合率31.55±14.72％相比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；ESCs組在傷后7d的創(chuàng)面愈合率為

4、95.11±6.11％，與空白對照組7d的創(chuàng)面愈合率78.33±10.17％相比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。兩組裸鼠傷后10天背部皮膚缺損創(chuàng)面全部愈合。DAPI熒光檢測顯示創(chuàng)面表皮層和真皮層有藍(lán)色熒光陽性表達(dá)；空白對照組創(chuàng)面組織未見陽性表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色顯示ESCs組的創(chuàng)面CK10、CK14呈陽性表達(dá)；空白對照組創(chuàng)面組織未見陽性表達(dá)。ESCs組創(chuàng)面表皮層PCNA免疫組織化學(xué)染色為陽性(++)表達(dá)；空白對照組的為弱陽性(+)表達(dá)