誘導(dǎo)表皮干細(xì)胞重建汗腺的實驗研究.pdf

1、皮膚汗腺分泌汗液,汗液在蒸發(fā)過程中帶走身體熱量.極少數(shù)人的汗腺缺失是由于基因、遺傳等先天因素引起,但絕大部分汗腺損失的原因是各種原因?qū)е碌钠つw缺損.缺損的皮膚組織被疤痕組織替代修復(fù),但汗腺組織難以自然再生.因此,當(dāng)汗腺缺失范圍達(dá)到體表面積一定比例時,皮膚的體溫調(diào)節(jié)功能出現(xiàn)障礙.人工皮膚在加快創(chuàng)面愈合速度,減少疤痕形成等方面優(yōu)勢明顯,而且己實現(xiàn)商品化.然而,最接近自然的人工皮膚,也僅具有表皮、真皮層結(jié)構(gòu),無汗腺及其它皮膚附屬器.實現(xiàn)汗腺人

2、工構(gòu)建,是目前組織工程及皮膚科學(xué)領(lǐng)域中都需解決的問題. 目的： 本研究希望通過模擬胚胎發(fā)育時期,汗腺發(fā)生所必需的條件,探索重建汗腺的可能性. 方法： 1.根據(jù)細(xì)胞體積大小及細(xì)胞表面標(biāo)志,富集純化表皮干細(xì)胞. 2.體外培養(yǎng)條件下應(yīng)用表皮生長因子 (EGF),探索體外誘導(dǎo)表皮干細(xì)胞向汗腺上皮分化可行性. 3.控制細(xì)胞外溶液Ca<'2+>濃度與作用時間,借助細(xì)胞粘合系統(tǒng)(CellAdhesion

3、 System,CAS) 介導(dǎo)表皮干細(xì)胞聚集.并觀察各種不同聚集方式對細(xì)胞干細(xì)胞表型以及汗腺細(xì)胞表型的影響. 4.以EGF對聚集的表皮干細(xì)胞進(jìn)行三維誘導(dǎo)培養(yǎng),研究在均一濃度以及梯度濃度誘導(dǎo)條件下,EGF對表皮干細(xì)胞形成類汗腺組織結(jié)構(gòu)的影響. 5.優(yōu)化干細(xì)胞誘導(dǎo)以及組織結(jié)構(gòu)發(fā)生條件,在免疫缺陷動物體內(nèi)嘗試汗腺重建. 結(jié)果： 表皮干細(xì)胞在EGF濃度為20ng/ml平面誘導(dǎo)條件下,以及EGF濃度為10ng/ml

4、三維立體誘導(dǎo)條件下,可以被誘導(dǎo)表達(dá)汗腺上皮細(xì)胞表型.而且,在EGF濃度為20ng/ml誘導(dǎo)條件下,三維立體誘導(dǎo)的表皮干細(xì)胞比二維平面誘導(dǎo)的表皮干細(xì)胞更早表達(dá)汗腺細(xì)胞表型mRNA.在Transwell中三維立體培養(yǎng)條件下EGF可形成非線性的濃度梯度,富集的表皮干細(xì)胞聚合體在三維立體培養(yǎng)條件下,向高濃度EGF區(qū)域遷移,形成汗腺導(dǎo)管樣結(jié)構(gòu). 結(jié)論： 通過上述研究,我們發(fā)現(xiàn)通過體外模擬胚胎發(fā)育時期,汗腺發(fā)生所需的條件,表皮干細(xì)胞