河北省斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥的流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、　　豬圓環(huán)病毒(PCV)首先由Tischer于1974年從PK-15豬腎傳代細(xì)胞系中分離獲得。豬圓環(huán)病毒為無(wú)囊膜單股環(huán)狀DNA病毒，屬圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬成員，該科還包括人IT病毒(TTV)，雞貧血病毒(CAV)，鸚鵡喙羽病病毒(PBFDV)等。研究表明，PCV-2與豬群中發(fā)生的許多新傳染病密切相關(guān)，包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬皮炎腎病綜合征(PDNS)、豬呼吸道疾病復(fù)合征(PRDC)及A2型先天性震顫(CT)等。 本研

2、究主要包括以下3個(gè)方面： 1、將構(gòu)建好的豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因的原核重組表達(dá)質(zhì)粒pETORF2轉(zhuǎn)化BL21(DE3)宿主菌，對(duì)培養(yǎng)條件及誘導(dǎo)表達(dá)條件(IPTG最佳濃度、作用時(shí)間)等影響表達(dá)的因素進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了PCV-2ORF2基因的高效表達(dá)。對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定、純化后，以純化的重組Cap蛋白作為包被抗原，對(duì)各種條件進(jìn)行優(yōu)化(如抗原的包被，作用時(shí)間及底物的選擇)，確定了判定標(biāo)準(zhǔn)，建立了檢測(cè)PCV-2抗體的間接ELISA方法。

3、 2、以原核表達(dá)重組蛋白為抗原建立的檢測(cè)PCV-2抗體的間接ELISA方法檢測(cè)河北省2002-2004年不同群體的豬的PCV-2抗體，結(jié)果表明PCV-2在我省豬群中感染是普遍的?！　?、根據(jù)GenBank中發(fā)表的豬圓環(huán)病毒2型全基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物建立檢測(cè)PCV-2的PCR方法.應(yīng)用建立的PCR方法我們對(duì)48份表現(xiàn)為貧血、消瘦且有呼吸癥狀的疑似病料進(jìn)行PCV-2檢測(cè)。結(jié)果表明，豬群中PCV-2與PRRSV及PPV混合感

4、染比較普遍?！　?、根據(jù)GenBank公布的PCV-2毒株的全基因序列，設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，用PCR方法擴(kuò)增出3個(gè)PCV-2地方分離毒株的ORF2基因。應(yīng)用DNAstar序列分析軟件，對(duì)3個(gè)PCV-2分離株ORF2基因序列進(jìn)行分析并繪制系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，結(jié)果表明本試驗(yàn)分離的3個(gè)PCV-2毒株所測(cè)的3個(gè)毒株的核苷酸序列同源性為100﹪，與世界上其它地區(qū)的PCV-2分離株密切相關(guān)。另外，不同PCV-2毒株之間基因組序列相對(duì)比較保守，但來(lái)源于不同